172923. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a digitális lanata és digitális purpurea növényekben előforduló digitoxigenin-glükozidok digoxinná, acetil-digoxinná, digitoxinná illetve gitoxiná történő átalakítására fermentáció útján
5 172923 6 digoxin szennyeződésként 2—3% gitoxint és dininatint tartalmaz, míg a digitoxin 4% gitoxint tartalmaz. A termékek tehát a DAB 7 (Deutsches Arheimittelbuch) és BP 73 szerinti etalonnak megfelelnek. 2. példa 20g friss Digitalis lanata növényt 15 g tengeri homokkal és 12 ml Sörensen-féle 7 pH-ju pufferoldattal[D’Ans, Lax: Taschenbuch für Chemiker, (1945), 1592, old.] együtt 10C°-on finomra eldörzsöljük és a kapott szuszpenziót ugyanazon a hőmérsékleten centrifugáljuk. Az extraktumot feltisztulása után 10 C°-on Sephadex G 25 WZ adszorbenssel töltött oszlopon keresztül szűrjük, A 2 ml térfogatú első frakció sárga színű glikozidokat és aminosavakat nem tartalmaz. Ezt a frakciót 10 mg dezacetil-lanatozid A-val összekeverjük, és az elegyet zárt edényben 30-35 C°-on 24 órán át erélyesen keverjük. A keletkezett glikozid-elegyet háromszor 2,0—2,0 ml 3:2 arányú kloroform-metanol-eleggyel végzett extrahálás útján különítjük el. A szerves fázisban levő anyagokat vékonyrétegkromatográfiai úton választjuk el szilikagél-lemezen, eluensként metilénklorid-metanol-víz 90 :10 : 1 térfogatarányú elegyet használunk. A keletkezett digitoxin, digoxin és gitoxin glikozidokat izoláljuk. 2 mg digitoxint, 1 mg digoxint és 0,5 mg gitoxint kapunk. 3. példa Frissen szedett Digitalis lanata leveleket 6,0 ph-jú Sörensen-pufferrel 10% szárazanyagot tartalmazó péppé dolgozunk össze. 10—10 kg péphez a) 5 g lanatozid A-t, b) 5 g dezacetil-lanatozid A-t, c) 5 g digitoxint, d) 5 g acetil-digitoxint adunk. Az elegyeket 4 napon át 20—30C°-on állandó keverés mellett zárt edényben inkubáljuk. A 4 nap elteltével a hozzáadott digitoxigenin-glikozidok 70-80%-a alakul át digoxinná, acetildigoxinná illetve gitoxinná. 4. példa Frissen szedett Digitalis purpurea leveleket (a szárított anyag purpurea-glikozid B-re, azaz dezacetil-lanatozid B-re átszámítva 0,12% digjtoxigenin-gjikozidokat és 0,050% gitoxigenin-glikozidokat tartalmaz) körülbelül 1 cm méretű darabokra tépünk, és silóba 1 m magasságig összetömjük. Az anyagot a silóban 30C°-on 4 napon át tároljuk, majd az 1. példában megadott módon szárítjuk. A szárított anyag 0,07% digitoxint és 0,18% gitoxint + gitaloxint tartalmaz. A digitoxint, illetve gitoxint az 1. példában leírt módon különítjük el a fenti összetételű szárított anyagból. Egy tonna drogból 0,350 kg digitoxint kapunk 95—97% tiszta anyagot tartalmazó glikozid alakjában, valamint 0,9 kg 95%-os gitoxint. Szennyeződésként a gitoxin digitoxint, a digitoxin gitoxint tartalmaz. 5. példa Frissen szedett Digitalis purpurea leveleket 7,0 ph-jú Sörensen-pufferoldattal mintegy 10% szárazanyagot tartalmazó péppé dolgozunk össze. 10—10 kg péphez a) 10 g dezacetil-lanatozid A-t, b) 10 g digitoxint adunk. Az elegyeket 4 napon át 30 C°-on állandó keverés mellett zárt edényben inkubáljuk. A 4 nap elteltével a hozzáadott digitoxigenin-glikozidok 75—80%-a alakult át gitoxinná. 6. példa 5 g légáramban 35 C°-on szárított Digitalis lanata leveleket 15 g tengeri homokkal és 18 ml 7,0 pH-jú Sörensen-pufferoldattal 10 C° finomra eldörzsöljük és a kapott szuszpenziót ugyanazon a hőmérsékleten centrifugáljuk. Az extraktumot feltisztulása után lOC-on Sephadex G 25 WZ adszorbenssel töltött oszlopon át szűrjük. Az első frakció (2 ml) sárga színű, glikozidokat és aminosavakat nem tartalmazó folyadék, amellyel 10 mg dezacetil-lanatozid A-val összekeverünk. Az elegyet zárt edényben 30-35 C°-on 24 órán át erélyesen keverjük. Utána az elegyet háromszor 2,0—2,0 ml 3 :2 térfogatarányú kloroform-metanol-eleggyel extraháljuk. A szerves fázisban levő anyagokat vékonyrétegkromatográfiai úton választjuk el Szilikagél G típusú lemezeken, eluensként metilénklorid-metanol-víz 90 : 10 : 1 térfogatarányú elegyet használunk. 2 mg digitoxint, 1 mg digoxint és 0,5 mg gitoxint kapunk. Azonos körülmények között a lanatozid C-nek a 149 426 számú magyar szabadalmi leírás, valamint a 42 345 számú NDK-beli szabadalmi leírás szerinti előállítása során keletkező lanatozid A koncentrátumok digoxinná és acetil-digoxinná alakíthatók át. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a Digitalis lanata növényben előforduló digitoxigenin-glikozidok, így lanatozid A, acetil-digitoxin és digitoxin digoxinná, adott esetben acetil-digoxinná, és gitoxinná történő átalakítására fermentáció útján, azzal jellemezve, hogy a) frissen szedett, aprított Digitalis lanata leveleket 20 és 45 C° közötti hőmérsékleten legalább 60 órán keresztül a levegőtől elzárva és/vagy nitrogén- vagy széndioxid légkörben fermentálunk majd adott esetben szárítjuk, vagy b) digUoxigenin-glikozidokat a fenti, friss vagy fagyasztva szárított vagy 35 C°-on szárított Digitalis növényekből nyert extraktum alakjában adagolt enzimrendszer hatásának teszünk ki, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
