172910. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és berendezés folyadékmiták vizsgálatára
11 172910 11 A. „Munka” standardokat úgy állítjuk elő, hogy hatóanyag mennyiséget. A T-4 munka-standardoelkészítünk I2x75mni-es teszt-csöveket és 1-5 kát az alábbi táblázat alapján készítjük. Csövek száma Adagolt barbitál puffer Elvett puffer Adagolt T-4 anyag Végső koncentráció 1 1,0 ml 0 ul 0 ul 0 ug/ml 2 1,0 ml 10 ul 10 ul T—4 alapanyag 3-ban oldva 2 ug/ml 3 1,0 ml 10 ul 10 ul 6 ug/ml 4 1,0 ml 20 ul 20 ul 12 ug/ml 5 1,0 ml 50 ul 50 ul 30 ul/ml Az alkalmazás során megmérünk kb. megszorozzuk 50-el. Ez a szám mutatja a szükséges 17 x 100 mm-es teszt-csövet 1-5., mindegyikbe 20 ANS mennyiséget. A Tetramet-125 mikrolitereinek töltünk 5 ml T-4 szabad plazmát. Elveszünk 50 a számát levonjuk a megfelelő mikrocurie-számból mikrolitert a fentiekben ismertetett megfelelő & ezt hozzáadjuk az ANS pontos térfogatához, „munka” standardból, jól összekeverjük, a végső Egy napi használatra alkalmas a készítmény, eredmények a következők lesznek. 25 G. Antitest reagens Csövek száma T-4 ng/ml T-4 ng/35 ul T-4 ugm/100 1 a 0 0 0 2 b 20 0,7 2 3 c 60 2,1 6 4 d 120 4,2 12 5 e 300 10,5 30 0. 5.ml-es adagokban megfagyasztjuk. F.Tiroxin JlíS oldat 1. ANS oldat. 60 mg 8-anilino-l-naftalin-szulfonsavat feloldunk 10 ml C reagensben. 2. Izotóp-oldat A tetramet oldat minimális nagyságrendje 500 mikrocurie. Az oldat hat hétig használható. A kimerülés időpontját Abbott szintben adjuk meg. Az aktivitás, például mikrocurie/milliliter minden tételnél változhat. Ezt a szint megadásnál ugyan- 55 csak meghatározzuk. 14 000 beütés percenként (CPM) minden tételnél a megfelelő szint, ennyit kell a kísérleti csövekben levő 50 ml-hez adni, a 14 000 cpm megfelel mintegy 0,014 mikrocúriénak. Meghatározzuk a kísérleti csövek teljes 60 számát, a standardeket, és az ismeretleneket, ezt a számot biztonsági okokból 10%-al megnöveljük és a végső számot 0,014-el megszorozzuk: ennyi az összes szükséges mikrocurie. A következőkben a csövek számát, beleértve a 10% pluszt is, 65 Az antitest liofilizált állapotban érkezik, min . egyes adagot be kell állítani 14 ml C reagenssel. Hűtőben való tárolás esetén 2 hétig alkalmas a 30 felhasználásra. Az eljárás során 50 mikroliter T-4-125 J oldatot, 35 mikroliter standardot, vagy szérum-mintát és 65 mikroliter desztillált vizet összekeverünk. Ezek után 200 mikroliter antitestet adunk 35 hozzá. A reakciót 30 percig futtatjuk első sebességben, szobahőmérsékleten az inkubátor szeparátorban, majd amikor a sebességet a második fokozatra emeljük, az egész reakcióban résztvevő térfogatot átvisszük a Sephadex C—25 oszlopra 40 (finom). A komplexet 2 ml barbitál-pufferrel eluáljuk. A komplexot gamma-számlálóban mérjük, egy percen keresztül. Minden mintát ismétlésben mérünk. A standardok (1-4.) 10 helyzetet foglalnak el. 45 A standardokat a következőképpen visszük fel: a percenkénti beütéseket az y-tengelyre és a Mgm/100ml logaritmusát az x tengelyre. A standardok, melyek a fentiek szerint készültek: 0,2,6,12,30 pgm tiroxin 100 ml. Az ismeretlent úgy 50 kapjuk meg, hogy felhasználjuk a standard görbéjét úgy, hogy megkeressük a tiroxin pmg/100 ml olyan értékét, mely megfelel az ismeretlennél mért beütési számoknak. A jelen találmány megvalósítása során, amit a fentiekben specifikus példában is bemutattunk, különleges előnyök érhetők el, ha a komplex-képző reakcióit lényegében gyorsan követi a reakcióban résztvevő anyagok elválasztása a 200 gél oszlopban, ellenőrzött körülmények között. Nézzünk egy általános esetet, melynek során a kiválasztott A és B reaktánsokat betesszük a 130 és 140 mélyedésekbe, majd keverjük őket és a külső 140 mélyedésekben reakciót indítunk el, mely alkalmas arra, hogy növekvő mennyiségben hozzon létre C reakció-terméket, ezután az A B és C anyagok 6
