172910. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és berendezés folyadékmiták vizsgálatára
13 172910 14 keverékét a 200 gél oszlopon rétegekre választjuk szét, melyeknek egyikét, amelyik legalább egy reaktánst tartalmaz a 65 kémcsőbe gyűjtjük, például A-t, vagy B-t. A C anyag lényegében a 200 géloszlopon marad, és bár a forgatást folytatjuk, további mennyiség a C anyagból nem keletkezik. A 200 jel oszlopról a C-í eljárjuk, az eluált fázisok paramétereit, például a radioaktivitását, színét, fluoreszcenciáját, enzim-szintjét megmérjük. A méréseknek lényegében az összes elemzett mintára vonatkozóan egyidőben kell történniük. Ez a megvalósítási mód azoknál az eljárásoknál bír különös előnyökkel, melyek kinematikus vizsgálatokat igényelnek. Ezek közé tartozik például a minták tiroid-hormon, nemi hormon szívreható glukozid, vitamin, rákantigén tartalma. A vizsgálatok során standard radioimmun vizsgálati reagenseket használunk. A vizsgálat további menete még érthetőbbé válik az 5(a) ábra alapján. Ez az ábra azt az időpontot rögzíti, amikor az A és B reagenseket, valamint a C reakcióterméket a 200’ kromatografáló gélre juttattuk, de az eluáló szert még nem továbbítottuk oda. Ilyen körülmények között az A és B anyagok még tovább képesek reagálni és így még keletkezik C termék. Amikor azonban az eluenst, melyet jelen esetben úgy választottuk meg, hogy a B kiindulási anyaggal együtt a C reakcióterméket is elválassza, felvisszük a 200’ kromatografálógélre, B-t és C-t igen gyorsan elválasztjuk az A-tól egy olyan réteg segítségével, melyet azután a 200’ kromatografáló gélen végig nyomatunk, ahogyan azt az 5(b) ábra mutatja. Ebben az esetben a C reakció-termék további képződését megakadályozzuk. Azt a 152’ fázist, mely B és C meghatározott mennyiségét tartalmazza, centrifugális erő segítségével a 65 kémcsőbe juttatjuk, amint azt az 5(c) ábrán bemutatjuk, majd azt a paramétert, mely érdeklődésre tart számot, akár B, akár C anyagban, megfelelő eljárással meghatározzuk. A jelen találmány másik kiviteli módjának esetében, amikor annak nincsen lényeges jelentősége, hogy a reakciót a 200 kromatografáló gélen megállítsuk, és az összes minták és standardok ugyanolyan reakcióban vesznek részt és egyforma módon különítjük el őket, akkor kromatográfiás gélt úgy választjuk meg, hogy eluálunk és a reakció-terméket különítjük el a reagensektől. Ez különösen azokban az esetekben áll fenn, amikor a reakció-termék további képződését a gélben és annak eluálását azzal kompenzáljuk, hogy vele együtt reagáltatjuk a standardot is. A jelen találmány kivitelekor az érdeklődésre számot tartó paraméter lehet a radioaktivitás, ahogy ezt a fentiekben már említettük, szín, a fluoreszcencia, vagy bármely más alkalmas kémiai, vagy fizikai paraméter. Ennek megfelelően a radioaktív számláló berendezés helyett más ismeretes érzékelő berendezések is használhatók. A találmány egy másik foganatosítása szerint, melyet a 6. ábrán mutatunk be, olyan 510 betétet használunk, melyen a sugárirányban elrendezett 130 és 140 mélyedések helyett különálló mélyedések sorozatát alkalmazzuk. Amennyiben a találmány kivitelezésekor a 6. ábrán levő berendezést használjuk, úgy egy vagy két reaktánst, például szérumot és reagenst pontosan meghatározott mennyiségben viszünk az 520 mélyedések 525 aljára és ebben folyik le az a reakció, melynek eredményeként fizikailag elválasztható reakció-termék keletkezik. Az 520 mélyedések megtöltése pipettázással is történhet, amint azt a fentiekben már említettük. Az 520 mélyedések közül egyet, vagy többet standard reaktánssal is megtölthetünk, oly módon, hogy azt már az előzőekben leírtuk. Az így előkészített 510 betétet ugyanúgy erősíthetjük fel a 15 tárcsára, ahogy azt az 1. ábrán bemutattuk. A megtöltött edényzetet forgatjuk olyan sebességgel, mely elegendő ahhoz, hogy az 520 mélyedések tartalmát a centrifugális erő a velük kapcsolatban levő 190 szeparátorba juttassa. Ettől kezdődően az eljárás a továbbiakban ugyanúgy folyik le, ahogy azt az 1. ábrán bemutatott készülékkel kapcsolatosan a fentiekben már leírtuk. Az előzőekben ismertetett megvalósítás folyamán az 510 betéteken levő 520 mélyedések a ccaktánsokkal megtölthetők és a reakciót az egyensúlyi állapotig lehet folytatni. Ez annyit jelent, hogy az 510 betéteket fel lehet tölteni és hosszabb ideig, például órákig, vagy még tovább lehet tárolni, ezután az 1. ábrán bemutatott 110 betét helyett lehet elhelyezni, majd a meghatározást az ott leírt módon elvégezni. Ez a megvalósítási forma hatásosan alkalmazható olyan esetekben, amikor lassú reakciókkal dolgozunk. Ilyen például az emberi növekedési hormonok meghatározása a vérszérumban, melynél, amennyiben a megelőzőekben leírt módszert alkalmaznánk, a kettős mélyedésekkel ellátott eszköz használatával, igen hosszú 1 órás, vagy annál is nagyobb forgatási időt igényelne a nagyobb sebességen. Más esetet véve alapul, amikor az 520 mélyedéseket olyan időtartam alatt töltjük meg, mely alkalmas a lassú reakció kivitelezésre, azt a gyakorlati tényt is szem előtt tarthatjuk, hogy minden egyes külön mélyedésben a reakciók egy időpontban indulnak meg, a megtöltött 520 mélyedések együttesen forgathatók és tartalmuk egyszerre továbbítható a velük összeköttetésben álló szeparátorokba, attól az időponttól kezdődően, amikor az elkülönítendő összetevő olyan mennyiségben keletkezett már amely mérhető. Ezt az eljárást azokban az esetekben lehet alkalmazni, amikor a vizsgálat pontosságában mutatkozó hiányosság, mely annak az eredménye, hogy a különböző mélyedésekben a reakció ideje nem egyezik teljesen meg, nem olyan jelentős, mint az eljárás kapcsán megmutatkozó időmegtakarítás. A jelen találmány különleges előnye, melyet az eredményez, hogy a megoldás folyamatos mechanikai és kémiai együttes eljárást tartalmaz, egyrészt hogy kiküszöböli a manuális, vagy mechanikai munkát a meghatározás alatt, minimálisra csökkenti azoknak a változóknak a jelentőségét, melyek a meghatározás szempontjából nem tartanak igényt az érdeklődésre, másrészt alkalmas arra, hogy igen rövid reakció-időket állapítsunk meg, végül lehetővé teszi azt is, hogy párhuzamos kinetikai vizsgálatokat folytassunk ellenőrzött időfeltételek mellett. 5 10 15 20 25 30 35 ■40 45 50 55 60 65 7
