172910. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és berendezés folyadékmiták vizsgálatára
9 172910 10 pon. Az eluálás után valamely kedvező időpontban a 65 kémcsöveket átvisszük a 3. ábrán bemutatott berendezésbe és mindegyik 65 kémcsövet 1 percen keresztül méljük. Az eredményeket a következő táblázatban bemutatjuk. Tábla 8 Sí, g N Sí M « 5 ^ ió“ " s « U M N <S ._ «> vu -gr S ,S <u S3 S /agm%T4 10 a 0 7623 0 15 a’ 0’ 7468 0 b 1 5398 2 b’ 1’ 5496 2 „Standard szinc 2 3194 6 tek”a 4. ábrában c’ 2’ 3307 6 felvéve 20 d 3 2235 12 a’ 3’ 2325 12 e 4 1299 30 e’ 4’ 1336 30 1 5 4544 4,7 25 1’ 5’ 4408 5,1 az ismeretlen 2 6 3009 8,9 klinikai munkák 2’ 6’ 2956 9,0 szintjei a 4, 3 7 3919 6,4 ábrán bemutatott 3’ 7’ 4051 6,1 görbéből mégha-30 4 8 4092 6,0 tározva 4’ 8’ 3899 6,4 5 9 3415 7,7 5’ 9’ 3627 7,1 6 10 4500 4,8 35 6’ 10’ 4389 5,2 7 11 4092 6,0 r 11’ 3899 6,4 8 12 3225 8,4 8’ 12’ 3192 8,2 40 9 13 3501 7,4 9’ 13’ 4052 6,0 Az ismert T—4 szinteket pgm/100 ml standard oldatra vonatkoztatva adjuk meg az a,a . e.e' 45 minták esetében, ezeket a percenként kapott számokat visszük fel a koordináta rendszerre és így nyerjük a 4. ábrán látható görbét. A klinikai minták meghatározott számadatait a 4. ábra görbéjéből kapjuk meg. A következőkben részle- 50 tesen írjuk le a felhasznált anyagokat, és a példában szereplő eljárás részleteit. Az elemzésre kerülő minták klinikai szérumok voltak. Az alkalmazott anyagok az alábbiak: 55 1. Tiroxin (T—4 alapanyag), szabad sav: Kát. sz. 2376 Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo. 2. Tiroxin"125J (T-4"125),: Kat. sz. 6751 „Tetramet-125 J” Abbot Labs. North Chicago, 60 Illinois. 3. Anti-tiroxin-szérum (nyúl), Wien Labs. Succasunna, New Yersey. 4. Sósav. Kát. sz. A—144. Fischer Scientific, New York, New York. 65 5. Nátriumhidroxid. 0,lN.Kat.sz. SO—S—276. Fischer Scientific. 6. Nátrium-barbitál. Kat.sz. B—22. Fischer Scientific. 7. Nátriumazid, Kat. sz. S—227 Fischer Scientific. 8. Normály nyúlszérum. 9. 8-anilino-1 -naftalin-szulfonsav-nátriumsó. (ANS) Kat sz. 9041. Kandk. Labs. Plainview, New York. 10. Normális emberi’ plazma. Plasma Products. 11. Aktivált csontszén. Darco G-60. Matheson, Coleman Bell, Rutherford, New Yersey. 12. Sephadex G-25, finom, (kromatografáláshoz alkalmas gél. Pharmacia Fine. Chemicals, Piscataway, N. J. 13. Oszlopok (a kromatográfiás gél számára) Kát. sz. 102 2 Walter Sarstedt, Inc. Princeton, N. J. 14. Csövek: 12x75 mm és 17xl00mm-es vizsgáló csövek. Reagensként az alábbi anyagokat alkalmaztuk. A. 6N sósav, 1 liter. B. barbitál-puffer, 0,075 M, pH 8,6, 1 liter 800 ml desztillált vizben oldott 15,54 g nátrium-barbitál és 100 mg nátriumazid. Szabványos pH-mérőt használunk, az oldat pH-ját 6N sósav cseppenkénti adagolásával 8,6-ra állítjuk, majd a barbitál oldatot bensőségesen összekeverjük. (Megközelítőleg 2 ml 6N sósavat kell felhasználni). Az így nyert oldatot egy literre feltöltjük desztillált vízzel. Ez a puffer hűtőszekrényben való tárolás mellett egy hónapig eláll. C. 2%-os normális nyúl-szérum-barbitál-puffer, 100 ml 2 ml normális nyúl-szérumhoz 98 ml barbitál-puffert adagolunk és erősen átkeverjük. Hűtőszekrényben tárolva két hétig használható. D. Tiroxinmentes emberi plazma, 20 ml. 3 g aktivált csontszeneí belekeverünk 20 ml emberi plazmába egy rendelkezésre álló 50 ml-es kúpos centrifugacsőben, vigyázva arra, hogy a csontszén teljes mennyisége átnedvesedjék. A keveréket lefedjük és egy éjszakán át hűtőszekrényben állni hagyjuk. A következő napon a keveréket centrifugáljuk 8000 fordulat/perc sebességgel 10 percen keresztül. Ezután megszűrjük a felülúszót egy olyan 20 ml-es fecskendő segítségével, mely fel van szerelve egy 25 mm-es millipórusos szűrőtartóval, melyen Swinnex előtét van, a szűrést három lépésben végezzük, a felülúszót (1) szűrőpapíron, (2) 0,45 mikronos szűrőn, (3) 0,22 mikronos szűrőn bocsátjuk át. Helyes ha az oldatot hetenként készítjük, de hűtőszekrényben tartva legalább három hónapig használható. E. Tiroxin (T-4) standard 6,00 mg Tiroxin T-4 alapanyagot minimális mennyiségű 0,1 N nátriumhidroxid-oldatban feloldunk, ezt az oldatot 10ml-re kiegészítjük desztillált vízzel. Ez a mennyiség felosztható 0,2 ml-es adagokra és fagyasztva három hónapon keresztül tárolható. 5
