172778. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens valamely szubsztrátum koncentrációjának enzimkinetikus meghatározására
15 172778 16 párhuzamos méréshez plazmát alkalmaztunk, mert a glükóz-dehidrogenáz-reakció még ismeretlen okokból gátolva van, ha nagyobb mennyiségben jutnak vérsejtek a kísérleti anyagba. (Előkísérietek azonban azt mutatták, hogy a kinetikus meghatározás 5 modifikált körülmények között fehéijementesítés után kitűnően elvégezhető, így egy teljes véranalízis ugyancsak lehetséges.) Plazma (illetve szérum) közvetlen használata a mérés gyors végrehajtását, valamint más anyagokkal, illetve enzimekkel való egy- 10 idejű kinetikus meghatározásokat tesz lehetővé. 1. Táblázat Ujratalálati arány glükóznak qualtrolban 15 való mérésénél Koncentrációadatok mmól glükóz/liter próba mennyiségben Koncentráció mért talált Saját tartalom levonása után Ujratalálati arány 31,4 37,7 31,8 101,5% 15,7 22,0 15,9 101,0% 12,5 18,5 12,6 100,5% 8,99 15,1 9,21 102,0% 5,24 11,2 5,27 100,5% 20 25 30 35 2. Táblázat 60 humánplazmával végzett összehasonlító vizsgálat eredményeiből (koncentrációtartomány körülbelül 4-16 mmól/liter plazma, 3. ábra, amely a közvetlen kinetikus meghatározással és az indirekt hexokináz-végértékmódszerrel mért glükózmeghatározás kapcsolatát mutatja) számítható a regressziós egyenes: y = 0,1255 + 0,9272 x, a nullától jelentősen különböző korrelációs koefficiens: r = +0,9965 és a regressziós egyenes körüli szórás: Sx .y = 0,2085. Ezen értékek szerint a két eljárás között szoros kapcsolat áll fenn. Az eredmények kinetikus meghatározás esetén azonban — gyakorlatilag koncentrációtól függetlenül - átlagosan 7%-al kisebbek, mint az azonos szabvány-oldat útján számított végérték-módszer koncentráció•értékei. Ez a különbség összhangban van a fehérjementesítésnél észlelt térfogatkiszorító hatással. Érdekes egy összehasonlítás a gyakorlatból ismert teljes vérelemzés hozzátartozó értékeivel, amelyet hexokináz-végértékmódszerrel fehérjementesítéssel határoztunk meg. Emellett a számításnál alkalmazott faktor 2,5%-kal kisebb a vizes glükóz-oldatnál „elméletileg” érvényes faktornál. A kinetikus elemzéssel szemben átlagosan 14%-os mínusz, a hexokináz-végérték-módszer szerinti plazma-analízissel szemben pedig mintegy 20%-os mínusz adódott. A kinetikus eljárás szerinti öt kontroli-szérumra megállapított glükózkoncentrációk a Precinorm S szérumig mindig nagyobbak a szükséges értéknél (2. táblázat). A Hyland-ControI-szérummal kapott eredmény talán a kisebb szükséges értékkel magyarázható, mint amelyek a glükóz-oxidáz-módszerre tipikusak. Kontroli-szérumok elemzése. Koncentrációadatok és szabványeltérések mmól glükóz/literben Szérum Számított Talált X x±2 s n X s VK Hyland Control 11,41> serum II 10,5-12,2 12 12,44 0,25 2,0 Móniiról II 11,6*) 10,7-12,5 12 11,89 0,32 2,7 Precinorm S 5,95 5,35-6,55 12 5,86 0,13 2,2 Pathotrol 13,92> 13,2-14,6 12 14,67 0,29 2,0 Labtrol 5,152> 4,80-5,50 12 5,37 0,16 3,0 1 ^glükóz-oxidáz (Hyland) 2^HK/G6P-ESí-végértékmódszer fehéijementesítéssel (Boehringer) A 2. táblázatban a kontroli-szérumokon a sorozatban talált pontosság egyidejűleg meg van adva, 60 amely tapasztalataink szerint ugyancsak összehasonlítható manuálisan végrehajtott hexokináz-végérték-módszerrel. A pontosságot napról napra Precinorm S-en VK = 3,4%-ig határoztuk meg. 65 3. példa Idegen inhibitorok zavaró befolyásának a találmány szerint elérhető kikapcsolását mutatják a következőkben megadott két táblázatban két különböző enzimre és mindenkor két különböző inhibitorra meghatározott mérési értékek. 8
