172644. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására
15 172644 16 (6R,7R)-7-amino-3-hidroximetil-cef-3-eni-4-karbonsav előállítása 5,0 g (6R,7R)-3-acetoximetil-7-amino-cef-3-em-4- -karbonsav-p-toluolszulfonát-dihidrátot (953 695 sz. brit szabadalmi leírás), szobahőmérsékleten 100 ml desztillált vízben szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz a szilárd anyag teljes mértékű feloldódásáig 0,880 g/ml fajsúlyú ammóniumhidroxid-oldatot adunk. Az így kapott 7,6 pH-értékű oldathoz 10 g mélyhűtött Rhodotorula rubra-szuszpenziót (CBS 6469) adunk. A szuszpenziót 30 órán át szobahőmérsékleten mechanikusan keverjük és folyamatosan levegőztetjük. Ekkor a hidrolízis 95%-ban lezajlott. (A reakció menetét vékonyrétegkromatográfiás úton követjük, adszorhensként szílikagéh, futtatószerként 0,5 mólos nátriumklorid-oldatot használunk, és a foltokat ultraibolya fényben tesszük láthatóvá.) Az élesztősejteket centrifugálással eltávolítjuk, és az átlátszó felső folyadékfázist dekantálás után 10 C°-ra hűtjük. Az elegyet 20%-os ortofoszforsavoldattal pH = 3,6 értékre savanyítjuk. A terméket leszűrjük, vízzel mossuk, és vákuumban 40C°-on szárítjuk. 1,23 g (52/)%) (6R,7R)-7-amino-3-hidroximetil-cef-3-em-4-karbonsavat kapunk: UV Xmax. (pH = 6 értékű pufferoldatban): 264,5 nm (e 7000), tisztasági fok (nagynyomású folyadékkromatográfiás úton mérve): 94%. A termék infravörös és NMR-spektruma megfelel a várt szerkezetnek. 6. példa 7. példa (6R ,7 R ,2 ’R)-7 -(2 ’-ter c-b ut o xikarbo nilamino - -2’-fenil-acetamido>3-hidroximetil-cef-3-em-4-karbonsav előállítása 14,67 g (6R,7R,2’R)-3-acetoximetil-7-(2’-terc-butoxikarbonilamino-2’-fenil-acetamido)-cef-3-em-4 -karbonsav (op.: 92-115 C°) 100 ml vízzel készített szuszpenziój át 2n nátriumhidroxid-oldattal pH = 6 értékig semlegesítjük. A kapott oldatot 100 ml 0,4 mólos foszfátpuffer-oldattal (pH = 6) hígítjuk, és az elegyhez 60 g, teljes Rhodotorula rubra sejteket (CBS 6469) tartalmazó fagyasztott pasztát adunk. A szuszpenziót 28 órán át erélyesen keverjük, eközben a szuszpenzióba levegőt buborékoltatunk. Az elegyet centrifugáljuk, a felső folyadékfázist dékántálással elválasztjuk, és 35 g nátriumkloridot adunk hozzá. A kevés kocsonyás anyagot tartalmazó oldatot kovasavgéllel derítjük. A szűrletet 500 ml etilacetáttal hígítjuk, 5 C -ra hűtjük, majd erélyes keverés közben 25%-os foszforsav-oldattal pH = 2 értékre savanyítjuk. A kapott emulziót zsugorított üvegszűrőn szűrjük, a szerves fázist elválasztjuk, telített vizes nátriumldorid-oldattal mossuk, és szárítjuk. Az előző lépésben felhasznált kovasavgélt 200 ml vízzel mossuk, a szűrletet nátriumkloriddal telítjük, majd az oldatra etilacetátot rétegezünk, és a fenti módon pH = 2 értékre savanyítjuk. A szerves fázist elválasztjuk, telített vizes nátriumklorid-oldattal mossuk, és szárítjuk. Az etilacetátos oldatokat egyesítjük, vákuumban körülbelül 80 ml végtérfogatra bepároljuk, és a terméket kristályosodni hagyjuk. A kristályos anyagot leszűrjük. 5,93 g finom, tűkristályos (6R,7R,2’R)-2-(2’-terc-butoxikarbonilamino-2’-fenil-acetamido)-3-hidroximetil-cef-3-em-4-karbonsavat kapunk, op.: 180-188 C° (bomlás), (a)l° = +19,1° (c = l,l%, dioxánban), UVAmax. (pH = 6 értékű foszfátpuffer): 259 nm (e 7200). 8. példa (6R,7R ,2 ’R)- 3-Hidro ximet il-7-(2 ’-hidro xi-2’-fenil-acetamido)-cef-3-em-4-karbonsav előállítása 2 g (6R,7R,2’R)-3-acetoximetil-7-(2’-hidroxi-2’-f e nil-acetamido)-cef-3-em-4-karbonsav (etanolos szolvát) (op.: 105-112 C°) 30 ml vízzel készített szuszpenzióját 2n nátriumhidroxid-oldattal pH = 6 értékig semlegesítjük, és a kapott oldathoz 30 ml 0,4 mólos foszfátpuffer-oldatot (pH = 6) és 10 g fagyasztott Rhodotorula rubra CBS 6469 teljes sejt-pépet adunk. A szuszpenziót 16 órán át erélyesen keverjük. Az elegyet centrifugáljuk, a felső folyadékfázist dekantálással elkülönítjük, és nátriumkloriddal telítjük. Az oldatot kovasavgéllel derítjük, és a szűrlethez etilacetátot adunk. Az elegyet 5 C°-ra hűtjük, és erélyes keverés közben 25%-os foszforsav-oldattal pH = 2 értékre savanyítjuk. A szerves fázist elválasztjuk, telített vizes nátriumklorid-oldattal mossuk, szárítjuk és vákuumban kis térfogatra bepároljuk. Az elegyet szűrjük. 1,05 g apró, lemezkristályos (6R,7R,2’R)-3-hidroximetil-7-(2’-hidroxi-2,-fenil-acetamido)-cef-3- -em-4-karbonsavat kapunk, op.: 225-230 C° (bomlás), (a)D° = +98° (c = 1,1%, 0,1 mólos nátriumhidrogénkarbonát-oldatban), UVXmax (pH = 6 értékű foszfátpuffer-oldatban): 260 nm (e 8200). 9. példa (6R,7R)-7-[2-(fur-2-il)-2-metoxiimino-acetamido]-3-hidroximetil-cef-3-em-4-karbonsav (szín izomer) előállítása (a) 101 mg (6R,7R)-3-krotonoiloximetil-7-[2- -(fur-2-il)-2-metoxiimino]-cef-3-em-4-karbonsav (szín izomer) (op.: 75-100 C°) 3 ml vízzel készített oldatát telített vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal pH = 6,8 értékig semlegesítjük, és az elegyhez 3 ml 0,4 mólos foszfátpuffer-oldatot (pH = 6) és 1 g fagyasztott Rhodotorula rubra CBS 6469 teljes sejteket tartalmazó pépet adunk. A szuszpenziót nyitott edényben 17 órán át körülbelül 20C°-on erélyesen keverjük, majd centrifugáljuk. A felső folyadékfázist dekantálással eltávolítjuk, kovasavgéllel derítjük és fagyasztva szárítjuk. A kapott amorf szilárd anyag kromatográfiás elemzés (Rf = 0,17, adszorbens: Merck-szilikagél lemez, futtatószer: 90 :16:5 arányú kloroform-metanol-ecet - sav elegy) és deutériumoxidban felvett NMR-spekt-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
