172604. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-lizin kinyerésére fermentáció útján
13 172604 14 Az alábbi összetételű táptalajt készítjük: lOg/d1 glükóz, 5 g/dl (NH4)2SCH, 0,1 g/dl KH2P04, 0,04 g/dl MgS04 • 7H20, 2 ppm Fe- és Mn-ion, 0,05 mg/liter tiamin • HC1, 0,05 mg/liter biotin, 1,5 ml/dl szójabab hidrolizátum (összes nitrogéntar - talom 7%) és 5 g/dl kalciumkarbonát, pH = 7,2. 20 ml táptalajt töltünk 500 ml-es rázólombikba és sterilizáljuk. Ezután a 6. táblázatban feltüntetett mikroorganizmusokkal oltjuk be az így előkészített táptalajokat, és 72 órán keresztül rázás közben 31 C°-on tenyésztjük. A termelt L-lizin (hidroklorid formájában) mennyiségeit a 6. táblázat tartalmazza. 6. táblázat 1. példa Törzs A termelt L-lizin mennyisége mg/dl Brevibacterium lactofermentum Y—108 (FERM P—1443) ATCC—21798 4,1 Brevibacterium lactofermentum AC—73 (FERM P— 1444) ATCC 21799 2,5 Brevibacterium lactofermentum AD—5 (FERM P—1445) ATCC 21800 3,0 Brevibacterium lactofermentum AD—162 (FERM P— 1446) ATCC 21801 2,8 Az AC—73 és az AD—162 törzseknél a táptalaj még 5 mg/ml kalciumpentotenátot és 100 mg/liter adenint, illetve guanint is tartalmazott. Az Y—108 törzs tenyészetéből a baktériumsejteket és az oldhatatlan kalciumsókat centrifugálással elválasztottuk, egy liter felülúszót erős kationcserélő gyantával (Amberlite IR—120 hidrogénionciklusban) töltött oszlopra viszünk fel. A gyantán adszorbeálódott L-lizint 3%-os ammóniumhidroxid-oldattal eluáljuk, és az eluátumot csökkentett nyomáson bepároljuk. A tömény oldathoz sósavat adunk és hűtőszekrénybe tesszük, ott tartva kikristályosodik az L-lizin hidroklorid. Ily módon 30,2 g nyers kristályos L-lizin hidroklorid dihidrátot kapunk. 2. példa Brevibacterium lactofermentum Y—108 (ATCC 21798), AC—73 (ATCC 21799), AD-5 (ATCC 21800) és AD-162 (ATCC 21801) törzseket a következő összetételű táptalajra oltunk: 1,5 g/dl glükóz, 0,3 g/dl ammóniumacetát, 0,1 g/dl KH2P04, 0,04 g/dl MgS04 • 7H20, 2 ppm Fe- és Mn-ion, 0,05 mg/liter biotin, 0,2 mg/liter tiamin • HC1, 1,5 ml/dl szójabab fehérjehidrolizátum (7% nitrogéntartalommal) és 0,5 g/dl élesztőextraktum. A táptalajok pH-ja 8,0, a tenyésztés hőmérséklete 31 C°, időtartama 16 óra, állandó keverés és levegőztetés közben. Mindegyik tenyészetből 15 ml-rel oltjuk be a következő összetételű főtáptalajt: 3 g/dl glükóz, 0,5 g/dl ajnmóniumacetát, 0,2 g/dl karbamid, 0,1 g/dl KH2P04, 0,04g/dl MgS04 • 7H20, 2 ppm vas- és mangán-ion, 0,05 mg/liter biotin, 0,05 mg/liter tiamin *HC1, 3 ml/dl szójabab fehérjehidrolizátum, azonkívül a 7. táblázatban feltüntetett külön tápanyagok, 7,5 pH-érték mellett. Az inkubálás 31,5C°-on történik 1500 perc/fordulatszámú keverés és 1 táptalajtérfogat/perc levegőztetés mellett. A tenyésztés folyamán a pH-t automatikusan szabályozzuk 7,2 és 8,0 közötti értéken tartva ecetsavból és ammóniumacetátból álló puffer adagolásával. A pufferelegy 60% ecetsavat tartalmazott és 0,25 mól ammóniumacetátot 1 mól ecetsavra vonatkoztatva. 48 órás tenyésztés során a képződött L-lizin mennyisége 4,8-6,4 g/dl között van. Az eredményeket a 7. táblázat szemlélteti. 7. táblázat Törzs Kiegészítő tápanyag mg/liter Termelt L-lizin g/dl Y—108 (ATCC 21798)-6,4 AC—73 (ATCC 21799) Ca-pantotenát: : 5 4,8 AD-5 (ATCC 21800)-5,7 AD-162 adenin: 100 (ATCC 21801) guanin: 1Ó0 6,0 3. példa Brevibacterium lactofermentum Y—108 (ATCC 21798), AC—73 (ATCC 21799), AD-5 (ATCC 21800) és AD—162 (ATCC 21801) törzseket 31,5 C°-on, 16 órán át rázatva tenyésztünk a következő összetételű inokulum táptalajon: 1,5 g/dl glükóz, 0,3 g/dl karbamid, 0,1 g/dl KH2P04, 0,04 g/dl MgS04 • 7H20, 2 ppm vas- és mangán-ion, 0,05 mg/liter biotin, 0,2 mg/liter tiamin hidroklorid, 1,5 ml/dl szójabab fehérjehidrolizátum és 0,5 g/dl élesztőkivonat. A táptalaj pH-ja 8,0. Mindegyik tenyészetből 15 ml-rel oltunk. be 300 ml főtáptalajt, amelynek összetétele a következő: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
