172604. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-lizin kinyerésére fermentáció útján
3 172604 4 jelenti, amelyek táplálékszükségletüket a fenti aminosav prekürzorokkal elégítik ki. A találmány szerint alkalmazott mikroorganizmus olyan mutáns is lehet, mely más biológiai tulajdonságokat, például más tápigényt és/vagy másfajta rezisztenciát is mutat egyéb anyagokkal szemben, az előbb említett tápanyagszükséglete és a lizin-analógokkal szembeni (ilyen például az említett AEC) rezisztencián kívül. A találmány szerinti eljárásban felhasznált törzseket szűrővizsgálattal, vagy hagyományos, mutánsképző módszerekkel nyerhetjük, mely módszereket a továbbiakban részletesen is tárgyalni fogjuk. A találmány szerinti eljárásban a következő jellegzetesebb mutánsokat használhatjuk fel: Brevibacterium lactofermentum Y—108 (ATCC 21798) (szerin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AC—73 (ATCC—21799) (pantoténsav-igényes és AEC-rezisztens törzs) Brevibacterium lactofermentum AD—5 (ATCC 21800) (tiamin-igényes és (AEC-rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AS-162 (ATCC 21801) (adenin- vagy guanin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AJ-3424 (FERM P-1711) (alanin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AJ-3425 (FERM P—1712) (alanin- vagy valin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AJ-3429 (FERM P-1857) (alanin- és leucin-igényes, valamint AEC-rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AJ-3391 (FERM P—1570) (prolin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AJ-3394 (FERM P—1573) (Bi2-vitamin-igényes és AEC rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AJ—3395 (FERM P—1574) (nikotinamid-igényes és AEC-rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AJ-3396 (FERM P-1575) (hipoxantin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AJ-3392 (FERM P—1571) (nikotinamid- és leucin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Brevibacterium lactofermentum AJ—3393 (FERM P—1572) (szerin- és leucin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Corynebacterium glutamicum AJ-3397 (FERM P-1613) (szerin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Corynebacterium glutamicum AJ-3458 (FERM P-1982) (prolin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Corynebacterium glutamicum AJ-3460 (FERM P-1984) (guanin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Corynebacterium glutamicum AJ-3461 (FERM P—1985) (Bj 2-vitamin- és leucin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Corynebacterium lilium AJ-3464 (FERM P—2026) (alanin-igényes és AEC-rezisztens törzs), Corynebacterium acetoacidophilum AJ 3465 (FERM P—2027) (alanin-igényes és AEC-rezisztens törzs). A FERM P-szám egyezményes deponálási, illetve azonosítási szám, melyet a következő intézmények használnak: Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science of Technology, the Ministry of the Industrial Science of Technology, the Ministry of the Industrial Trade and Industry. 1. kísérlet Meghatározott tápanyagszükséglettel rendelkező mutáns törzseket replikációs módszerrel izoláljuk teljes agar-agaros tenyészetekből, amelyeket a Brevibacterium lactofermentum ATCC 13869 törzsből röntgen-besugárzással, majd 31 C°-on 4—10 napon keresztül történő tenyésztésével kaptunk. Az így izolált mutánsok tápanyagszükségletét ismert módszerekkel határoztuk meg. Eredményül a sok mutáns között négy olyant kaptunk, melyek szerin-, pantoténsav-, tiamin-, illetve guanin-igényesek voltak. Ezután a négy mutáns mindegyikét 30 C°-on 30 percen keresztül 0,2 mg/ml nitrozoguanidinnel kezeltük, majd agar-lemezekre oltottuk át őket. A táptalaj a következő anyagokat tartalmazza: 2 g/dl glükóz, 0,3 g/dl karbamid, 30 mg/dl szerin, lOmg/liter kalcium pantotenát, lOOmg/liter adenin, 0,5 g/dl treonin, 0,1 g/dl KH2P04, 0,04g/dl MgS04 • 7H20, 2 ppm Fe++, 2 ppm Mn**, 0,05 mg/liter biotin, 0,1 mg/liter tiamin, 0,5 mg/ml AEC és 2 g/dl agar-agar. A közeg pH-ja 7-es. Az így elkészített tenyészeteket 4-10 napon keresztül 31 C°-on inkubáltuk. Ily módon a következő négy mutáns törzset — amelyek alkalmasak nagymennyiségű L-lizin termelésére — izoláltuk, a fenti lemezeken kinőtt összes telep L-lizin-termelő képességének vizsgálata után: Brevibacterium lactofermentum Y—108 (AEC1, + Ser") Brevibacterium lactofermentum AC-73 (AEC1' + Pantoténsav") Brevibacterium lactofermentum AD-5 (AEC1, + Tiamin") Brevibacterium lactofermentum AD-162 (AEC1, + Adenin" vagy Guanin") A négy mutáns törzs növekedését minimál-táptalajon és minimál-táptalaj és az egyik esszenciális tápanyagkomponens keveréken a következő módon vizsgáltuk: s 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
