172446. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-[L-(-)-gamma-amino-alfa-hidroxi-butiril]-kanamicin A előállítására
15 172446 16 A táblázat folytatása Frakció Cső száma Ammóniumhidroxid eluálószer (súly) Bio-hozam 4. 170-197 0,3 n—0,5 n 1877 mg 1350 mg BB-K 8 + (30%) (23%)+2 * BB-K 11 5. 198-203 0,5 n 100 mg BB-K 11 (2%) 6. 238-257 1,0 n 146 mg diacilezett (2%) vegyület B. subtilis PCI 219-re vizsgálva. *2 K. pneumoniae A 20680-ra vizsgálva, amely a BB-K 8-ra érzékeny és a kanamicinre, a BB-K 11 -re és a BB—K 29-re rezisztens. A 4. frakciót (1,877 g) 10 ml dezionizált vízben feloldjuk. Az oldat pH-értékét 10%-os sósavval 6-ra beállítjuk és CG-50 gyantaoszlopra (NH4\ 15 ml) visszük, amelyet 100 ml 0,3 n ammóniumhidroxiddal és 200 ml 0,5 n ammóniumhidroxiddal eluálunk. Az eluátumot 20 ml-es frakciókra bontjuk. A 6. és 8-17. csövek tartalma ninhidrinre pozitív. A 8-17. csövek tartalmát egyesítjük és vákuumban 1 ml-re koncentráljuk. A koncentrátumot 3 ml metanollal kezeljük és szűrjük. A szűrletet 0,5 ml 30 75%-os vizes metanollal mossuk. A szűr letet és a mosófolyadékokat egyesítjük, még 10 ml metanollal hígítjuk és éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az amorf csapadékot kiszűrjük, a szűr- 25 letet beoltjuk, ekkor színtelen kristályok alakjában kapjuk az I képletű vegyületet, amely a standard mintával azonos. A szűrletet vákuumban bepároljuk és liofilizáljuk. A frakciók hozamait és vizsgálatának eredményeit a következő táblázat szemlélteti. I Mennyiség Vizsgálat módja B. subtilis K. pneumoniae Hozam B subtilis K.pneumoniae amorf por 70 mg 737 ju/mg 927 m/mg 0,9% 1,1% kristályok 1098 mg 1163 p/mg 1087 ju/mg 19% 19% liofilizált por 180 mg 608 p/mg 504 ni mg 1,9% 1,6% BB-K 11 a 3”-N-[L-(-)-7-amino-a-hidroxi-butiril]-kanamicin A BB—K 29 a 3-N-[L-(— )-7-amino-a-hidroxi-butiril]-kanamicin A. L-(-)-y-Benziloxikarbonilamino-ü-hidroxi-vajsav (V) 5,2 g (0,13 mól) nátriumhidroxid 50 ml vízzel készített oldatához 7,4 g (0,062 mól) L-(-)-y-ami- 55 no-a-hidroxi-vajsavat adunk. Az oldathoz keverés közben, 0 -5 C°-on, 0,5 óra alatt 11,7 g (0,068 mól) benziloxikarbonilkloridot adunk, és a reakciókeveréket még 1 órán át ugyanezen a hőmérsékleten keverjük. A reakciókeveréket 50 ml 60 éterrel mossuk, a pH-értékét hígított sósavval 2-re beállítjuk, és 4 x 80 ml éterrel extraháljuk. Az éteres extraktumokat egyesítjük, kevés telített nátriumklorid-oldattal mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk és szűrjük. A szűrletet vákuumban 65 bepároljuk, és a maradékot benzolból kristályosítjuk. 11,6 g (74%) cím szerinti vegyületet kapunk színtelen lemezek alakjában. Op.: 78,5—79,5 0°, [a]D: 4,5° (c = 2, metanol). IR spektrum (KBr): i>CIO 1740, 1690 cm-1. MMR spektrum (aceton-d6 ) (ő-értékek ppm-ben, tetrametilszilán): 2,0 (2H, m), 3,29 (2H, d-d, J = 6,7 és 12 Hz), 4,16 (1H, d-d, J = 4,5 és 8 Hz), 4,99 (2H, s), 6,2 (2H, széles), 7,21 (5H, s). A C( 2H, 5NO5 összegképletre az analízis eredménye: Számított: C = 56,91%, H = 5,97%, N = 5,53%, Talált: C = 56,66%, H = 5,97%, N = 5,47%. 8
