172446. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-[L-(-)-gamma-amino-alfa-hidroxi-butiril]-kanamicin A előállítására
13 1 / Z'f'fO 14 6’-N-Benziloxikarbonil-kanamicin A (II) (ó’-Cbz-kanamicin A) 4,84 g (0,01 mól) kanamicin A szabad bázist 50 ml 50%-os vizes tetrahidrofuránban feloldunk, és ehhez az oldathoz keverés közben, 1 óra alatt, 7 C°-on több részletben 3,14 g (0,01 mól) 4. példa szerint előállított vegyületet adunk. A reakcióelegyet még 4 órán át keverjük, majd vákuumban bepárolva a szerves oldószert eltávolítjuk. A visszamaradó vizes oldatot 150 ml vízzel hígítjuk és 2 x 100 ml vízzel telített butanollal extraháljuk. A butanolos fázist 100 ml vízzel mossuk és vákuum5. példa ban bepároljuk. 1,78 g poli-Cbz-kanamicin A terméket kapunk. A vizes fázist és a mosófolyadékokat egyesítjük és vákuumban 50ml-re koncentráljuk. A vizes oldatot CG-50 ioncserélő gyantát 5 (NH4+, 140 ml) tartalmazó oszlopra visszük, amelyet egymás után 200 ml vízzel, 1,9 liter 0,05 n ammóniumhidroxiddal, 1,9 liter 0,1 n ammóniumhidroxiddal és végül 1 liter 0,3 n ammóniumhidroxiddal eluálunk. Az eluátumot 20 ml-es frakciókra 10 osztjuk és a vékonyrétegkromatogramon kapott Rf-értékek alapján két frakcióra választjuk szét (vékonyrétegkromatogram: S-114, ó’-Cbz-kanamicin Rf = 0,23, kanamicin Rf = 0,07). A frakciókat vákuumban bepároljuk, és a maradékot foszfor- 15 pentoxidon vákuumban szárítjuk. Frakció Cső száma Eluálószer Mennyiség Azonosság 1 106-144 0,1 n NH4OH 3,44 g (56%) ó’-Cbz-kanamicin (11) 2 203-212 0,3 n NH4OH 0,54 g (11%) visszakapott kanamicin Az így előállított ó’-Cbz-kanamicin (II) igen tiszta és homogén, a szilikagél lemezen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint. Op.: 217—219 C°. A fiziko-kémiai jellemzők a standard mintáéval azonosak. 6. példa l-N-[L-(—)-7-amino-a-hidroxi-butiril]-kanamicin A (BB—K8, I) benzaldehid-Schiff-bázison keresztül 6,19 g (0,01 mól) ó’-Cbz-kanamicin (II) 50 ml 50%-os tetrahidrofuránnal készített oldatához ke- 40 verés közben 3 ml (0,03 mól) benzaldehidet adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 3 órán át ke‘ veijük, majd 5 C°-ra lehűtjük és 4 g (0,01 mól) IV képletű vegyülettel 50 ml tetrahidrofuránban kezeljük. A reakciókeveréket 1 órán át 5 C°-on kever- 45 jük, a pH-értékét ón sósavval 2-re beállítjuk, még 1 órán át szobahőmérsékleten keveijük, és a szerves oldószert vákuumban végzett bepárlással eltávolítjuk. A visszamaradó vizes oldatot 20 ml metilénkloriddal mossuk, a pH-értékét 10%-os ammóniumhidroxiddal 4-re beállítjuk és az oldatot éjszakán át 30 szobahőmérsékleten atmoszféranyomáson, 1,25 g 10%-os palládium!szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Ezután a a katalizátort kiszűrjük, és 20 ml vízzel mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékokat egyesítjük, a pH-értékét 10%-os ammó- 35 niumhidroxiddal 8-ra beállítjuk és CG—50 (NH4+, 200 ml gyantaoszlopra visszük, amelyet 0,4 liter vízzel, 1,2 liter 0,1 n ammóniumhidroxiddal, 2,06 liter 0,3 n ammóniumhidroxiddal, 0,92 liter 0,5 n ammóniumhidroxiddal és végül 1,2 liter 1,0 n ammóniumhidroxiddal eluálunk. Az eluátumot 20 ml-es frakciókra bontjuk, és a szilikagél lemezen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálattal (S—110, ninhidrin), kapott Rf-értékek alapján két frakcióra választjuk szét, és a frakciókat Petri csészében B. subtilis PCI 219 és P. aeruginosa A 9843 mikroorganizmusokra vizsgáljuk. A frakciókat vákuumban bepároljuk, és fagyasztva szárítjuk. Ammónium-Frakció Cső száma hidroxid eluálószer (súly) Bio-hozam 1. 90-99 0,3 n 1630 mg (33%) 1490 mg (30%)+1 visszakapott kanamicin 2. 152-161 0,3 n 483 mg (8%) BB-K 29 3 162-169 0,3 n 376 mg (6%) 196 mg (3%r2 BB-K 29 * + BB-K 8 +1B. subtilis PCI 219-re vizsgálva. +2K. pneumoniae A 20680-ra vizsgálva, amely a BB-K 8-ra érzékeny és a kanamicinre, a BB-K 11-re és a BB-K 29-re rezisztens. 7
