172247. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 5-fluor- citozint és kandicidint vagy trichomicint tartalmazó szinergetikus gyógyászati készítmény előállítására
3 172247 4 Az N-glikozid-származékok és sóik önmagukban ismert módszerekkel állíthatók elő [The Journal of Antibiotics 28, 244—245 (1975) és az ott idézett irodalmi helyek]. A találmányunk szerinti eljárással előállított hatóanyag-kombináció fungisztatikus és fungicid hatása alapján gombák és élesztők (pl. a Candida, Cryptococcus, Sporotrichum, Aspergillus vagy Saccharomyces genushoz tartozó mikroorganizmusok) által előidézett fertőzések ellen alkalmazhatók. A találmányunk szerinti eljárással előállított készítmények különösen Candida-fajok (pl. Candida albicans) által előidézett fertőzések kezelésére valamint a gyomorbéltraktus és a nemiszervek bőrén és nyálkahártyáin fellépő fertőzések (pl. vaginitis) helyi kezelésére különösen alkalmasak. A készítményeket előnyösen lokális formában (pl. kenőcsök, kenőfolyadékok, kúpok) vagy más megfelelő alakban alkalmazhatjuk. A szinergetikus gyógyászati készítményt önmagában ismert módon azaz a két hatóanyag és szokásos szerves vagy szervetlen hordozóanyagok és/vagy segédanyagok (pl. víz, zselatin, tejcukor, keményítő, magnéziumsztearát, talkum, növényi olajok, polialkilénglikolok, vazelin, konzerváló-, stabilizáló-, nedvesítő- vagy emulgeálószerek, az ozmózisnyomás változását előidéző sók vagy pufferek) összekeverésével állíthatjuk elő. A találmányunk szerint előállított készítmények előnyösen kandicidint vagy a fentiekben meghatározott származékaikat tartalmazzák. A készítmény meglepő fungisztatikus és fungicid szinergetikus hatást mutat az egyes komponensek hatását figyelembevéve. így pl. a 10 mg/g 5-fluor-citozint és 0,03 mg/g kandicidint tartalmazó találmányunk szerint előállított készítmény patkányon kísérleti vaginal-candidiasisban lényegesen jobb kemoterápiás hatást fejt ki, mint a 30 mg/g 5-fluor citozint vagy 0,1 mg/g kandicidint önmagában tartalmazó kenőcs. A találmányunk szerinti készítmény további meglepő előnye, hogy az 5-fluor-citozinnal szembeni rezisztencia kialakulásának gyakoriságát csökkenti. A találmányunk szerint előállított készítmény szinergetikus hatása felülmúlja az ismert 5-fluor-citozin/amphotericín B kombináció [Medoff G. és tsai: Proc. Soc. Exp. Bioi. Med. 138, 571—574 (1971)] szinergetikus aktivitását. A két komponens súlyaránya tág határokon belül változhat. Az 5-fluor-citozin/kandicidin vagy kandicidin-származék arány (kandicidin NF-aktivitásra vonatkoztatva) 40—4000:1, előnyösen 100—400:1; az 5-fluor-citozin/trichomicin, illetve trichomicin-származék arány (8 E/p.g trichomicin aktivitására vonatkoztatva) 20—2000: 1, előnyösen 50—200: 1. A készítmény adagolását az adott eset követelményeinek megfelelően választjuk meg, előnyösen adhatunk naponta 1—2 db, az 1—3. példák szerint előállított tablettát néhány napon át. A találmányunk szerinti eljárással előállított készítmény szinergetikus hatását az alábbi további adatokkal igazoljuk. 1. 5-fluor citozint (5-FC) és kandicidint, amphotericin B-t vagy trichomicint tartalmazó készítmények in vitro fungicid szinergetikus hatása Sabouraud (antagonista anyagokban dús) táptalajon (20 g dextróz + 10 g pepton literenként). A) Metodika 10, 50, 100 és 200 jj.g/ml 5-FC-t és 0,012, 0,025 és 0,05 [Ag/ml kandicidint, vagy 0,25, 0,5 és 1,0 [Jtg/ml amphotericint, vagy 0,016, 0,035, illetve 0,07 [Jtg/ml trichomicint tartalmazó 10 ml-es tenyészetkémcsövek tartalmát 105 élesztősejttel beoltjuk (C. albicans ATCC 26 790). 3 napos inkubálás után a még élő élesztősejteket meghatározzuk és az elpusztult sejtek százalékos arányát kiszámítjuk. A C. albicans növekedését 10—200 fzg/ml koncentrációban sem az 5-FC sem az antibiotikum nem befolyásolja önmagában. B) Eredmények Az eredményeket az 1—3. ábrán ismertetjük. C) Értékelés A fenti eredmények azt mutatják, hogy 100 (Ag/ml 5-FC-t és 1 [Jtg/ml amphotericin B-t; vagy 100 [Jtg/ml 5-FC-t és 0,05 [xg/ml kandicidint; vagy 200 jzg/ml 5-FC-t és 0,07 [Jtg/ml trichomicint tartalmazó kombinációk az élesztősejtek 100%-os pusztulását idézik elő. Az eredmények egyértelműen igazolják, hogy az 5-FC/kandicidin és 5-FC/trichomicin kombináció hatásában messze felülmúlja az 5-FC/amphotericin B kombináció aktivitását. Az ilyen mértékű hatásnövekedés meglepő és a technika állásának ismeretében nem volt előrelátható. 2.5-FC-t és kandicidint vagy amphotericin B-t tartalmazó készítmény in vivo szinergizmusa. A ) Metodika és eredmények Patkányon vaginális candidiasist helyi kezeléssel gyógyítunk. Ösztrogéneken tartott ovarektomizált patkányokat 5—10 millió C. albicans sejtnek a vaginába juttatásával megfertőzünk. Az állatokat 6 intravaginális kezelésnek vetjük alá. A teszt-készítményt polietilénglikolos oldatban hatszor, a fertőzés után 4, 6, 20, 30, 40 és 54 órával alkalmazzuk. A fertőzés utáni 1., 3. és 6. napon a vaginából organizmus-tenyészetet veszünk és a növekedésben levő telepeket megszámoljuk. A teszt szerint a kezeletlen kontroliból vett valamennyi tenyészetben egész idő alatt számos telep növekszik. Ezzel szemben a kezelt állatokban a telepek száma a hatóanyag-koncentrációtól függően jelentős mértékben csökken. Az eredményeket az alábbi táblázat tartalmazza : A telepek kezeléséhez használt hatóanyag A telepszám csökkenésének mértéke (hányadrészére csökken) 5-FC 10% 1/10 Amphotericin B 0,25% 1/2 Kandicidin 0,05% 1/4 5-FC 10% + amphotericin B 0,25% 1/77 5-FC 10% + kandicidin 0,05% 1/400 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
