172223. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy diszulfidhídon kívól legalább egy ciszteingyököt tartalmazó peptidek előállítására
17 172223 18 Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen RfioiA = =0,4; Rfio7 —0,35. 11. Boc-Asn-Gln-His-Leu-Cys(Acm)-G!y-OMe 27,3 g, e példa 10. pont szerint előállított terméket és 40,5 g Boc-Asn-ONp-t 140 ml DMF-ben oldunk, az oldathoz 12,6 ml N-metilmorfolint adunk, 1 óra hosszat 25°-on keverjük, mégegyszer hozzáadunk 8,4 ml N-metilmorfolint és éjszakán át állni hagyjuk. 0°-ra való lehűtés után a metilmorfolin-hidrokloridot szűréssel elkülönítjük, a nyersterméket a szűrletből etilacetáttal kicsapjuk és metanol—éter elegyből való átcsapás útján tisztítjuk. Ily módon a hexapeptid-származékot kapjuk amorf por alakjában, amely (bomlás közben) 175—177°-on olvad. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rno) A = —0,6; Rfio7 =0,65; Rf43c =0,3; Rfuo =0,45. 12. H-Asn-Gln-His-Leu-Cys(Acm)-Gly-OMe. 2 HC1 26 g, e példa 11. pontja szerint kapott terméket 130 ml trifluoretanol és 130 ml metanol elegyében oldunk, az oldathoz 260 ml 4,8 n dioxános sósavat adunk és az egészet 20 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk. A hexapeptid-származékot 520 ml etilacetát és 260 ml petroléter hozzáfolyatása útján 0°-on por alakban kicsapjuk, szűréssel elkülönítjük és nagyvákuumban szilárd KOH felett szárítjuk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen RfioiA = =0,3; Rf43C =0,12. 13. Boc-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys(Acm)-Gly-OMe 33 g Boc-Val-ONp-t, 27 g, e példa 12. pontja szerint előállított terméket és 18 ml N-metilmorfolint 400 ml DMF-ben oldunk és az ily módon készített oldatot 6 */2 óra hosszat 50°-on melegítjük. Az elegyet ezután nagyvákuumban olajjá sűrítjük és a nyersterméket éter hozzáadása útján kicsapjuk. A nyersterméket metanol- 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldatból és metanol— etilacetát elegyből való átcsapás útján tisztítjuk. Op. 210—212°. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen: Rfl0) A = =0,6; Rf32 =0,15; Rf43C =0,35. 14. Boc-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys(Acm)-Gly-OH 20.6 g, e példa 13. pontja szerint készített terméket 164 ml metanol és 226 ml víz elegyében forrásig való melegítés közben oldunk, az oldathoz, amelyet előbb 10°-ra hűtöttünk, hozzáadunk 82 ml 1 n nátriumhidroxid-oldatot és az egészet 8 percig 25°-on állni hagyjuk. Az elegyet ezután 82 ml 1 n sósav hozzáadása útján semlegesítjük és körülbelül 250 ml térfogatra betoményítjük. A kapott oldatot ellenáramú megosztásban n-butanol-ammóniumacetát-pufferben (7,7 g ammóniumacetát +5,72 ml jégecet +1000 ml víz; pH =4,75) tisztítjuk. A tiszta heptapeptid-származékot 166 lépcső után az 54—75 számú csövekből (rm,x =64; K =063) elkülönítjük szárazrapárlás, a puffer elszublimálása és a kapott amorf por nagyvákuumban 45°-on való szárítása útján. Op. 220° (bomlás közben). Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf43E = =0.45; Rno, =0.5; =0,55. 15. H-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys(Acm)-Gly-OH 9 g, e példa 14. pontja szerint előállított terméket 225 ml, 94%-os jégecettel készített, 0,72 n sósavban szuszpendálunk és a kapott szuszpenziót 30 percig 25°-on keverjük, eközben körülbelül 20 perc elteltével átlátszó oldatot kapunk. Ezt az oldatot liofilizáljuk és a szárítási maradékot nagyvákuumban 30°-on utánaszárítjuk. Vékonyrétegkromatogram szilikagélen: Rf43E =0,18; Rf45 =0,18;RflolA =0,3. 16. Boc-Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys(Acm)-Gly-OH 467 mg, e példa 15. pontja szerint készített terméket 10 ml DMF-ben oldunk, amely 0,5 ml vizet is tartalmaz, az oldathoz hozzáadunk 765 mg (Boc-Phe)20-t és 275 fii N-metilmorfolint, majd az elegyet 3 óra hosszat 50°-on állni hagyjuk. Az elegyet ezután egy kocsonyaszerű maradék képződéséig nagyvákuumban besűrítjük, ezt a kocsonyás anyagot 0,1 mólos ammóniumacetátpufferrel(pH =4,75) eldörzsöljük, szűréssel elkülönítjük, vízzel mossuk és utána szárítjuk. A nyersterméket éterrel való eldörzsölés és trifluoretanol—éter elegyből való átcsapás útján tisztítjuk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf43E = =0,45; Rf45 =0,27; Rf52 =0,21. 17. Boc-Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys(Acm)-Gly-Ser(But)-His-Leu-Val-Glu(OBut6-Ala-Leu-Tyr(But)-OMe 1,66 g, e példa 16. pontja szerint előállított terméket és 290 mg toluolszulfonsav-monohidrátot 45°-ra való melegítés közben 32 ml abszolút DMF-ben oldunk és egymásután hozzáadunk 1,7 g 18 ml DMF-ben oldott H-Ser(But)-His-Leu-Val-Glu(OBut)-Ala-Leu-Tyr(But)-OMe-t [Zahn és munkatársai, Ann. Chem. 731, 91 (1970)] és 467 mg 6 ml DMF-ben oldott N-hidroxibenzotriazolt; végül még hozzáadunk szilárd alakban 2,51 g diciklohexilkarbodiimidet és az elegyet 40 percig 45°-on keverjük. A kocsonyává szilárdult anyagot 300 ml éterrel homogenizáljuk, a képződő finom pelyhes csapadékot szűréssel elkülönítjük, éterrel mossuk és szárítjuk. Tisztítás végett a nyersterméket 80 ml (19: 1 térfogatarányú) trifluoretanol—jégecet elegyben 40 percig 50°on melegítjük, 250 ml éter hozzáadása útján a terméket kicsapjuk és nagy vákuumban KOH felett szárítjuk. Ily módon amorf, a legtöbb oldószerben nehezen oldható port kapunk, amely körülbelül 250°-on olvad. Titrálással történt meghatározás szerint 1,15 egyenértéknyi toluolszulfonsavat és 0,85 egyenértéknyi ecetsavat tartalmaz. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen RfIOO = =0,3; Rf43 = 0,35; Rf7o =0,6;Rf|)0 =0,6. 18. Boc-Phe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys( Acm)-Gly-Ser(But)-His-Leu-Val-Glu(OBut)-Ala-Leu-Tyr(But+OH (III) 6,4 g, e példa 17. pontja szerint előállított terméket 65°-on 470 ml trifluoretanolban oldunk, az oldathoz 145 ml vizet és 191 ml 1 n nátriumhidroxid-oldatot adunk, az elegyet 5 óra hosszat 50c-on keverjük, 20°-ra 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
