172223. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy diszulfidhídon kívól legalább egy ciszteingyököt tartalmazó peptidek előállítására
15 172223 16 4. Boc-Cys(Acm)-Gly-OMe 20,5 g Boc-Cys(Acm)-OH-t és 7,5 g H-Gly-OCH,-t (utóbbit a hidrokloridból a felhasználás előtt közvetlenül felszabadítva) 250 ml kloroformban oldunk, az oldathoz 4,7 g N-hidroxibenzotriazolt és 17,3 g diciklohexilkarbodiimidet adunk és az elegyet 4 óra hosszat 25°-on keverjük. A diciklohexilkarbamidot szűréssel elkülönítjük és egymásután kevés 1 n citromsavoldattal, 1 mólos nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és nátriumklorid-oldattal mossuk, vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és szárazra pároljuk. Az olajos maradékot kromatográfiásan tisztítjuk 300 g szilikagéllel, amelyet (2: 1 arányú) etilacetát—petroléter eleggyel töltünk be. A tiszta terméket etilacetáttal eluáljuk, a termék olaj, amely etilacetát—petroléter elegyből kikristályosítható. Op. 83—86°. Vékonyrétegkromatogram szilikagélen : Rf43A =0,49; (9 : 1 arányú) kloroform—metanol rendszerben Rf = =0,42. 5. H-Cys(Acm)-Gly-OMe. HC1 5 g Boc-Cys(Acm)-Gly-OMe-t 20 ml metanolban oldunk és az oldathoz hozzáadunk 50 ml 4,4 n dioxános sósavoldatot. Az elegyet 10 percig állni hagyjuk 25°-on, majd a felére betöményítjük és 100 ml étert adunk hozzá. Az anyalúgot elkülönítjük az amorf csapadéktól, amely a betöményítéskor keletkezik, és a csapadékot szárítjuk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen (7 : 3 arányú) kloroform—metanol elegyben Rf =0,45 I Rf52 — =0,21. 6. Boc-Leu-Cys(Acm)-Gly-OMe 32,45 g H-Cys(Acm)-Gly-OMe.HCl-t és 12,5 ml N-metilmorfolint feloldunk 130 ml DMF-ben, az oldatot 0°-ra hűtjük és hozzáadunk 46 g Boc-Leu-ONp-t. Az elegyet előbb 1 óra hosszat 0°-on, utána 2 óra hosszat 25°-on keverjük, majd újból hozzáadunk 11,8 ml N-metilmorfolint és éjszakán át 25°-on állni hagyjuk. Az elegyet ezután 0°-ra hűtjük, a kikristályosodott N-metilmorfolinhidrokloridot szűréssel elkülönítjük és a szűrletet nagyvákuumban betöményítjük. Az olajos maradékot 300 ml etilacetátban oldjuk, majd egymásután mossuk káliumhidroxid-oldattal (5,4 g KOH 100 ml vízben), 0,5 n nátriumkarbonát-oldattal, 1 n citromsav-oldattal és nátriumkloriddal telített vízzel, ezt követően pedig szárazra pároljuk. A nyersterméket éterrel való eldörzsölés és benzol—petroléter elegyből történő átcsapás útján tisztítjuk és így amorf port kapunk. Op. 112—113°. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf}2 = =0,62; Rfloo =0,90; (8: 2 arányú) kloroform—metanol elegyben Rf = =0,65. 7. H-Leu-Cys(Acm)-Gly-OMe.HCl 30 g 6. pont szerint kapott terméket feloldunk 120 ml metanolban, az oldathoz 300 ml 4,1 n dioxános sósavat adunk és az egészet 20 percig 25°-on állni hagyjuk. Az oldatot ezután felére betöményítjük, 600 ml étert adunk hozzá, a kezdetben kenőcsszerű csapadékot porítjuk, szűréssel elkülönítjük, éterrel mossuk és a maradékot nagyvákuumban szilárd KOH felett szárítjuk. A termék 0,1 n nátriumhidroxid-oldattal való titrálás alapján 1,1—1,3 egyenértéknyi sósavat tartalmaz. (A szárítás körülményeitől függően alakul a sósav mennyisége.) Vékonyrétegkromatogram szilikagélen Rf52 = 0,20; Rfioo =0,23; (8 : 2 arányú) kloroform—metanol elegyben Rf = =0,31. 8. Boc-Gln-His-NH-NH2 27,9 g Boc-Gln-His-OCHj-t [Marchiori és munkatársai, J. Chem. Soc(C) 1967, 81] 280 ml nagyon tiszta metanolban oldunk, az oldathoz 28 ml hidrazinhidrátot adunk és 20 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk. A reakcióelegyet ezután nagyvákuumban szárazra pároljuk és a maradékot metanol—etilacetát—petroléter elegyből átkristályosítjuk. Op. 187—189°. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf32 = =0,12; Rfioo =0,1. 9. Boc-Gln-His-Leu-Cys(Acm)-Gly-OMe 25,3 g, e példa 8. pontja szerint előállított és finoman porított terméket 260 ml DMF-ben szuszpendálunk és — 20°-on 40 ml 3,2 n dioxános sósavat és ezt követően 9,45 ml terc-butilnitrilt adunk az oldathoz. Az elegyet ezután 15 percig — 12°-on keverjük és utána 28,6 g, e példa 7. pontja szerint előállított termék 120 ml DMF- fel készített oldatát adjuk hozzá, ugyanakkor 28 ml N-metilmorfolint is adagolunk hozzá. Az elegyet ezután egy óra hosszat 0°-on keverjük, majd mégegyszer hozzáadunk 10,5 ml N-metilmorfolint és utána 20 óra hosszat 0°-on állni hagyjuk. A kikristályosodott metilmorfolin-hidrokloridot szűréssel elkülönítjük, a szűrletet nagyvákuumban betöményítjük, etilacetáttal kétszer eldörzsöljük és a porszerű maradékot szárítjuk. A terméket ellenáramú elosztás útján 200 lépcsőben (2: 1:4 arányú) metanol—puffer—kloroform rendszerben tisztítjuk (puffer: 38,5 g ammóniumacetát +57,2 ml jégecet -f-lOOOml víz). A kromatográfiásan tiszta terméket, a tiszta pentapeptid-származékot, az 54—88 csövekből kapjuk (rmax =71; K =0,55) szárazrapárlás és a puffersó nagyvákuumban 45°-on való elszublimálása útján. A terméket újból vízben oldjuk oly módon, hogy 5%-os vizes oldatot készítünk belőle és liofilizáljuk ; ily módon a termék acetátját kapjuk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf43c= =0,4; Rfioo =0,5; Rnoi a =0,73. 10. H-Gln-His-Leu-Cys(Acm)-Gly-OMe. 2 HC1 28g,e példa 9. pontja szerinti terméket 140 ml trifluoretanol és 140 ml metanol elegyében oldunk, az oldatot 0°-ra hűtjük és 280 ml 4,4 n dioxános sósavoldatot adunk hozzá. Az elegyet ezután 5 percen át 25°-on reagálni hagyjuk, ismét 0°-ra hűtjük, a terméket 560 ml etilacetát és 280 ml petroléter hozzáadása útján kicsapjuk és a felül levő oldatot dekantáljuk. Az amorf maradékot (2: 1 arányú) etilacetát—petroléter eleggyd eldörzsölve porítjuk és nagyvákuumban szilárd KOH felett szobahőmérsékleten szárítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
