172153. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hepatitisz virus eltávolítására
7 172153 8 tályosan kiváló hidrazidot szűrtük, jeges vízzel és szobahőmérsékletű vizes metanollal (1: 1) mostuk. A SepharoseR 4B aktiválását az 1. példában leírt módon hajtottuk végre, majd az aktivált gélt kaprilhidrazid dimetilformamid és 0,2 M nátriumhidrogénkarbonát elegyével (1: 1) készült telített oldatának 100 ml-éhez adtuk. A kapcsolási reakció folyamán a pH értékét változatlanul hagytuk. A reakció 15 óra alatt ment végbe szobahőmérsékleten és keverés közben. A kapott terméket alaposan átmostuk dimetilformamiddal, dimetilformamid és víz 1: 1 arányú elegyével, 1 M nátriumklorid-oldattal, vízzel és pufferrel. Az összekapcsolási reakciónak a hidrazidra számított hozamát protonmágneses rezonancia spektroszkópiával (HA 100) határoztuk meg, az értéke 2,3% volt. Au-antigén vizsgálat Kiindulási anyagként olyan Au-antigénre pozitív plazmát használtunk, amelynek a titere immundiffúzió és immunelektro-ozmoforézis tesztek alapján 1: 128 volt. 3 rész jól leülepített, pufferrel egyensúlyba hozott adszorbenst 1 rész pufferben szuszpendáltunk, és a szuszpenzióhoz hozzáadtunk 2 ml, Au-antigénre pozitív plazmát. Az elegyet enyhén mozgattuk 30 percig, és a gélt centrifugálással elkülönítettük, A folyadék tisztája Au-antigénre negatívnak bizonyult az immundiffúzió, az immunelektro-ozmoforézis és a Hepanosticon alapján. 4. példa Au-antigén eltávolítása albumin-oldatból SepharoseR-(etiléndiamin-oktil-borostyánkősav)-konjugátummal történő adszorpcióval A gélszármazék előállítása A gél-konjugátumot az 1. példában leírtak szerint állítottuk elő. Au-antigén vizsgálat Kiindulási anyagként Au-antigénre pozitív plazma frakcionálásával előállított, immundiffúzió és immunelektro-ozmoforézis alapján 1: 64 titerű, Au-antigénre pozitív albumin-oldatot használtunk. Az adszorpciót szakaszosan hajtottuk végre a 3. példában leírt módon. A centrifugálás utáni folyadék tisztája negatívnak bizonyult Au-antigénre az immundiffúzió, az immunelektro-ozmoforézis és a Hepanosticon tesztek alapján. 5. példa Au-antigén eltávolítása koagulációs faktor koncentrátumból SepharoseR-(etiléndiamin-oktil-borostyánkősav)-konjugátummal történő adszorpcióval A gélszármazék előállítása A gél-konjugátumot az 1. példában leírt módon állítottuk elő. Au-antigén vizsgálat Au-antigénre pozitív plazmát használtunk egy II, VII, IX és X koagulációs faktorokat tartalmazó koncentrátum frakcionálásához. 1%-os fehérje-oldatot készítettünk, és az immundiffúziós vizsgálattal azt tapasztaltuk, hogy az Au-antigén titere 1: 32. A pufferrel egyensúlyba hozott 5 ml gélből ágyat alakítottunk ki egy üvegszűrőn, hozzáadtunk 10 ml vizsgálandó fehérje-oldatot, és a gélt 3X 5 ml pufferrel mostuk. Az eluátumot megvizsgáltuk Au-antigénre immundiffúziós, immunelektro-ozmoforézises és Hepanosticon teszttel, és az negatívnak bizonyult. 6. példa Au-antigén eltávolítása SepharoseR-tetradecilamin-konjugátummal történő adszorpcióval A gélszármazék előállítása A SepharoseR gél aktiválását az I. példában leírt módon végeztük. Az összekapcsolási reakcióhoz 100 ml, brómciánnal aktivált, 95%-os etanollal egyensúlyba hozott és leszívatással megszárított SepharoseR gélt hozzáadtunk 22 g tetradecilamin 100 ml 95%-os etanollal készített oldatához. Az elegyet 48 órán át kevertük szobahőmérsékleten, majd a gélt alaposan átmostuk meleg 95%-os etanollal, vizes etanollal (1: 1), 1 M nátriumklorid-oldattal, vízzel és pufferrel. Az összekapcsolási reakció termelése protonmágneses rezonancia (HA 100) alapján 4,3% volt. Au-antigén vizsgálat Kiindulási anyagként olyan Au-antigénre pozitív plazmát használtunk, amelynek a titere az immundiffúzió és az immunelektro-ozmoforézis teszteken 1: 128 volt. 10 ml, pufferrel egyensúlyba hozott gélszármazékból üvegszűrőn ágyat alakítottunk ki, és hozzáadtunk 35 ml plazmát. Az anyagot 3X10 ml pufferrel mostuk, és az eluátumokat megvizsgáltuk Au-antigénre. Azt tapasztaltuk, hogy az eluátumok negatívak az immundiffúzió, az immunelektro-ozmoforézis, Hepanosticon és Ausria tesztek alapján. 7. példa Au-antigén eltávolítása plazmából SepharoseR-(2- -amino-dodekán)-konjugátummal történő adszorpcióval A gélszármazék előállítása 2-Dodekanonból 2-amino-dodekánt állítottunk elő úgy, hogy hidroxilaminnal reagáltattuk, és a képződött oxidot katalitikus hidrogénezésnek és vízelvonásnak vetettük alá. A SepharoseR gél aktiválását az 1. példában ismertetett módon végeztük el. Az összekapcsoláshoz 100 ml, brómciánnal aktivált, 95%-os etanollal mosott és leszívatással megszárított gélt 10 g 2-amino-dodekán 100 ml 95%-os etanollal 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
