172153. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hepatitisz virus eltávolítására
9 172153 10 készített oldatához adtunk, az elegyet 48 órán át kevertük szobahőmérsékleten, majd a gélt alaposan kimostuk meleg 95%-os etanollal, vizes etanollal (1: 1), 1 M nátriumklorid-oldattal, vízzel és pufferrel. Az összekapcsolási reakció termelése protonmágneses rezonancia spektroszkópia (HA 100) alapján 1,0% volt. Au-antigén vizsgálat Kiindulási anyagként olyan Au-antigénre pozitív plazmát használtunk, amelynek a titere az immundiffúzió és immunelektro-ozmoforézis teszteken 1: 128 volt. A vizsgálatot a 3. példában leírt módon hajtottuk végre, és a centrifugálás utáni folyadék tisztája Au-antigénre negatív volt az immundiffúzió, az immunelektro-ozmoforézis és a Hepanosticon tesztek alapján. 8. példa Au-antigén eltávolítása plazmából SepharoseR-(etiléndiamin-undecin-10-sav)-konjugátummal történő adszorpcióval A gélszármazék előállítása A SepharoseR-etiléndiamin gélszármazékot az 1. példában leírt módon állítottuk elő. 1,85 g undecilénsav és 2,1 g diciklohexilkarbodiimid 100 ml dioxánnal frissen készített oldatához hozzáadtunk 100 ml SepharoseR -etiléndiamin-konjugátumot, amelyet előzetesen egyensúlyba hoztunk dioxánnal, majd leszívattuk. A gél szuszpenziót 15 órán át kevertük szobahőmérsékleten, majd dioxánnal, dioxán és víz 1: 1 elegyével, 1 M nátriumklorid-oldattal és pufferrel mostuk. Az összekapcsolási reakció termelését protonmágneses rezonancia vizsgálattal (HA 100) határoztuk meg; az 2,3% volt. Au-antigén vizsgálat Kiindulási anyagként olyan Au-antigénre pozitív plazmát használtunk, amelynek a titere az immundiffúzió és az immunelektro-ozmoforézis alapján 1: 128 volt. A vizsgálatot a 3. példában leírt módon hajtottuk végre. A centrifugálás utáni folyadék tisztája az immundiffúzió, az immunelektro-ozmoforézis és a Hepanosticon tesztek alapján negatívnak bizonyult. 9. példa Au-antigén eltávolítása plazminogén koncentrátumból SepharoseR-kaprilhidrazid-konjugátummaI történő adszorpcióval A gélszármazék előállítása A gél-konjugátumot a 3. példában ismertetett módon állítottuk elő. Au-antigén vizsgálat 2 ml plazminogén oldathoz hozzáadtunk 0,5 ml Au-pozitív plazmát. A kapott elegy erősen Au-pozitív volt az immundiffúzió és az Ausria tesztek alapján. Az elegyet 4 cm-es oszlopon vezettük át, amely 10 ml, pufferrel egyensúlyba hozott gél-konjugátumot tartalmazott. A plazminogén-tartalmú eluátum negatívnak bizonyult az immundiffúziós és az Ausria tesztek alapján. 10. példa Au-antigén eltávolítása plazmából poliakrilamid-(propilén-decilamin)-konjugátummal történő adszorpcióval A gélszármazék előállítása Poliakrilamidot (BiogelR P 300, gyártó Bio-Rad, Richmond, California, Amerikai Egyesült Államok) vízben duzzasztottunk, majd 0,05 M nátriumfoszfát pufferrel (pH=7,0) alaposan kimostuk. Az aktiváláshoz 0,5 g száraz gélt 25 ml pufferben szuszpendáltunk, és 20 ml szuszpenziót 5,0 ml glutárdialdehiddel elegyítettünk, és az elegyet 18 órán át tartottuk 37 °C hőmérsékleten. Ezután a gélt alaposan kimostuk dioxánnal, dioxán és víz 3 : 2 arányú elegyével, vízzel és pufferrel. Az összekapcsoláshoz a száraz gélt 3 g decilamin 30 ml dioxán—víz eleggyel (60—40%) készített, 8 pH-értékű oldatához adtuk, az elegyet 18 órán át kevertük 4 °C-on, majd a gélt dioxánnal, dioxán-víz eleggyel (60—40%), vízzel és pufferrel mostuk. Au-antigén teszt Kiindulási anyagként olyan Au-antigénre pozitív plazmát használtunk, amelynek a titere az immundiffúzió és az immunelektro-ozmoforézis alapján 1: 128 volt. A tesztet a 3. példában ismertetett módon hajtottuk végre. A centrifugálás utáni folyadék tisztáját Au-antigénre negatívnak találtuk az immundiffúzió, az immunelektro-ozmoforézis és a Hepanosticon tesztek alapján. 11. példa Au-antigén eltávolítása plazmából SepharoseR-(ciszteamin-oktil-borostyánkősav)-konjugátummal történő adszorpcióval A gélszármazék előállítása A SepharoseR-ciszteamin konjugátumot SepharoseR-cisztamin redukciójával nyertük. Ez utóbbit az 1. példában ismertetett eljárással analóg módon állítottuk elő. 0,05 M merkaptoetanollal 0,1 M karbonát pufferoldatban (pH=8,5) 1 órás reagáltatással. A gélt alaposan kimostuk a karbonát pufferrel, vízzel és végül dioxánnal. Ezután 1,2 g oktil-borostyánkősav 40 ml dioxánnal készített oldatához hozzáadtunk 10 ml dioxánban oldott 1,84 g diciklohexil-karbodiimidet és 25 ml SepharoseR-ciszteamin gélt. Az elegyet 2 órán át kevertük szobahőmérsékleten, majd további 1,84 g diciklohexil-karbodiimidet adtunk hozzá. 2 óra múlva a gélt dioxánnal kimostuk. A reakciót megismételtük, és végül a gélt alaposan kimostuk dioxánnal, dioxán— víz eleggyel, vízzel és 0,1 M karbonáttal (pH=8,5). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
