172146. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cinnolin-származékok előállítására
15 172136 16 (latból, melyeket leszűrünk és vízmentes etanolból átkristályosítunk. A kapott 6-bróm-cinnolin-3-il-karboxíhidrazid 250 C° felett olvad. Kitermelés: 60%. 33. példa 0,25 mg 6-fenil-cinnolin-3-il-karbonsavat 0 C°-on jégfürdőn 1 ml tömény kénsavban oldunk. Az oldathoz 0,5 ml tömény salétromsavat (fajsúly 1,42) adunk és gőzfürdőn 5 órán át visszafolyató hűtő alkalmazása mellett forraljuk. A kapott halványbama oldatot zúzott jég és víz elegyébe (50 ml) öntjük, a kiváló szilárd anyagot szűrjük, 3X10 ml vízzel mossuk és vizes etanolból kristályosítjuk. A kapott 6-(dinitro-fenil)-cinnolin-3-il-karbonsav 196—198 C°-on olvad (a termék feltehetően a különböző dinitro-fenil helyzeti izomerek keverékéből áll). Kitermelés: 62%. 34. példa 1 g 6-etil-cinnolin-3-il-karbonilkloridhoz 10 ml vizes ammóniaoldatot (fajsúly 0,88) adunk. A szuszpenzíót egy éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük, majd szűrjük és a szilárd anyagot vizes etanolból kristályosítjuk. A kapott 6-etil-cinnolin-3-il-karboxamid 215—216 C°-on olvad. Kitermelés: 60%. 35. példa A 27. példában ismertetett eljárással analóg módon a megfelelő kiindulási anyagok felhasználásával 6-bróm-cinnolin-3-il-karbonsav-benzilésztert állítunk elő. Op.: 171 C°. Kitermelés: 30%. 36. példa 0,7 g 6-nitro-cinnolin-3-il-karbonsav-etilészter és 100 mg platinaoxid 20 ml vízmentes etanollal, 20 ml acetonnal és 0,5 ml jégecettel képezett elegyét hidrogén-atmoszférában szobahőmérsékleten és atmoszferikus nyomáson 24 órán át rázatjuk. Az elegyet gőzfürdőn felforraljuk és a forrásban levő oldathoz 10 g mangándioxidot adunk. (A fenti redukciós körülmények között viszonylag kevés 1,4-dihidro-cinnolin-származék képződik, mely a mangándioxid hatására a megfelelő cinnolinszármazékká alakul vissza.) A szuszpenziót 30 percen át visszafolyató hűtő alkalmazása mellett forraljuk, majd Celiten átszűrjük. A szűrlethez 1 g „Kieselgel 60”-t adunk és az elegyet szárazra pároljuk. A maradékot 50 g „Kieselgel 60”-t tartalmazó oszlop tetejére visszük, etilacetáttal eluáljuk, a megfelelő frakciókat bepároljuk és a maradékot vizes etanolból átkristályosítjuk. A kapott 6-izopropilamino-cínnolin-3-il-karbonsav-etilészter 167—168 C°-on olvad. Kitermelés: 16%. 37. példa A 10. példában ismertetett eljárással analóg módon a megfelelő kiindulási anyagok felhasználásával 6-metil-cinnolin-3-il-karbonsav-metilésztert állítunk elő. Op.: 170—172 C°. Kitermelés: 15%. 10 g 6-brónvcinnolin-3-il-karbonsav, 65 g kukoricakeményítő, 130 g kalciumfoszfát és 1 g magnéziumsztearát keverékét préseljük, majd 16-os méretű szitán való átnyomással granuláljuk. A kapott granulátumból 25 mg hatóanyagtartalmú tablettákat préselünk. Az (1) általános képletü vegyületek hatását az alábbi tesztekkel igazoljuk: Passzív bőr-anafilaxíás teszt Mintegy 50 nősténypatkányból álló csoport állatait (Alderley Park I. törzs, 120—130 g) oly módon tesszük érzékennyé, hogy egyik hátsó lábukba intramuszkulárisan 0,1 ml izotóniás sóoldatban készült kétszer kristályosított tojásalbumin-oldatot (10 mg/ml), majd intraperitoneálisan adjuvánsként Bordetella pertussis vakcinát (0,5 ml vakcina, mely 2X 10'° organizmust tartalmaz) fecskendezünk. A B. pertussist a Burroughs Wellcome et Co., The Wellcome Foundation Ltd., London (Nagy-Britannia) cég hozza kereskedelmi forgalomba. 10 nap múlva a patkányokból a következőképpen készítünk szérumot : A patkányokat éterrel enyhén érzéstelenítjük, mellkasukat felnyitjuk, majd kardiális punktúrával vért veszünk. A vért 4 C°-on egy éjjelen át alvadni hagyjuk, majd centrifugáljuk és a szérumot elválasztjuk. Az egyedi szérumokat összegyűjtjük és — 20 C°-on tároljuk. Ez a szérum az IgE-típusba tartozó homocitotrop antiteszteket tartalmaz, mivel a passzív bőr-anafilaktikus hatás (értékelését az alábbiakban ismertetjük) legalább hét napig megmarad és ez a hatás a szérum 56 C°-on 2 V4 órán át történő előzetes melegítése vagy 2-merkapto-etanollal való előzetes inkubálása hatására megszűnik. Hím és nősténypatkányok (Alderley Park I. törzs, 180—200 g) egyik előzetesen leborotvált lágyékába az előzőekben leírt szérum izotóniás só-oldattal ll2 és Vi6 arányban hígított oldatából 0,1 ml-t permetezünk. A patkányoknak két nap múlva tojás-albumin és Evans’ Blue izotóniás só-oldattal készült oldatát adjuk be intravénásán (1 ml, 5 mg tojásalbumint és 0,25 súly/tf/o Evans’ Blue-t tartalmaz). Rögtön ezután hármas-ötös csoportok állatainak a teszt-vegyületet az adott dózisban beadjuk; minden öt csoportra egy 3 patkányból álló kontroli-csoportot alkalmazunk, melynek állatai csak oldószert kapnak (lásd az alábbiakban). A teszt-vegyületeket a következőképpen adagoljuk: a) Orálisan szonda segítségével 5 ml/kg (azaz 200 g-os patkánynak 1 ml) 0,5%-os vizes polioxietilénszorbitánmonooleát-oldattal („Tween 80”, Chemicals Division. ICI Americas, Wilmington, Delaware 19897 USA cég terméke) képezett megfelelő koncentrációjú szuszpenzio alakjában; vagy b) intravénásán 5 ml/kg (azaz 200 g-os patkánynak 1 ml) izotóniás konyhasó-oldattal vagy — vízoldhatatlan teszt-vegyület esetében—oldásközvetítő közegben képezett megfelelő koncentrációjú oldat alakjában. Utóbbi esetben megfelelő mennyiségű teszt-vegyületet 1 térfogatrész dimetilszulfoxidban oldunk és előbb 1 terfogatrész „Cremophor” EL-t (BASF Ludwigshafen Rhein NSZK cég terméke), majd 8 térfogatrész meleg izotóniás konyhasó-oldatot adunk hozzá. A kontroli-állatok 5 ml/kg mennyiségben orálisan vagy intravénásán 0,5 súly%,-os vizes polioxietilénszor-38. példa 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
