171838. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(alfa-fenil-alfa-amino)- acetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav észterek előállítására
13 171838 14 mokat a megfelelő hidrogénklorid-sóval vettük fel.) A kiindulási anyagként használt 7-amino-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav-metil-szulfonil-etilészter infravörös spektruma (kálium-bromid pasztillában) 1785 és 1730 cm-1; NMR-spektruma (DMSO—D5 -ban felvéve): 2,19 (3H), 3,00 (3H), 3,55 (4H), 4,55 (2H), 5,04 (1H) és 5,20 (1H) p.p.m. (A spektrumokat a megfelelő hidrogénklorid-sóval vettük fel.) 5 2. példa Az V. táblázatban felsorolt mikroorganizmusok 3 na- 10 pos ferde tenyészetéből egy oltókacsnyi mennyiségű anyaggal 200 ml térfogatú lombikokba töltött 40—40 ml B jelzésű táptalajt beoltunk, majd a tenyészeteket rázatás közben 48 órán át 28 °C-on inkubáljuk. A kapott tenyészetekből a sejteket centrifugálás útján elkülönítjük, 15 majd 40 ml 0,05 mólos foszfát-pufferoldattal (amelynek pH-ját előzetesen 6,0-ra beállítottuk) mossuk és ugyanebből a pufferoldatból 10 ml-rel szuszpendáljuk. Az így kapott szuszpenziókat 2,5—2,5 ml mennyiségben kémcsövekbe töltjük, majd a sejtszuszpenziókhoz D-2-fenil-glicin-metilésztert és az alábbi táblázatban felsorolt 7—ADCA-észterek közül valamelyiket adjuk, és az így kapott reakcióelegyeket az 1. példában ismertetett módon 60 percen át inkubáljuk. A kapott eredményeket az alábbi V. táblázatban adjuk meg. V. táblázat 7— ADCA-észter (csak az észterező csoportot adjuk meg) Acetobacter pasteurianus (IFO—3223) Acetobacter turbidans (IFO—3225) Acetobacter xylinum (IFO—8144) Gluconobacter suboxydans (IFO—3130) 7— ADCA-észter (csak az észterező csoportot adjuk meg) A B c A | B c A B | C A B c metil-szulfonil-etiletil-szulfonil-etil-H(7—ADCA) + + + + + + + + + 70% 65% 72% =-95% >95% >95% + + + + + + + + + 70% 65% 68% >95% >95% >95% + + + + + + + + + 60% >95% 55% >95% 58% | >95% + + + + + + 42% 28% 30% >95% >95% >95% 1. A = A termék mennyisége. 2. B = A 7—ADCA-észter mennyiségének csökkenése. 3. C = A cefem-mag összkihozatala. 3. példa Az alábbi VI. táblázatban felsorolt mikroorganizmusok 2 napos, ferde tenyészetéből egy oltókacsnyi menynyiségű anyaggal 200 ml-es lombikokba töltött 40—40 ml C jelzésű táptalajt beoltunk, majd a tenyészeteket rázatás közben 48 órán át 28 °C-on inkubáljuk. Ezután az egyes tenyészetekből a sejteket centrifugálás útján elkülönítjük, majd 10—10 ml 0,05 mólos foszfát-pufferoldattal (amelynek pH-ját előzetesen 6,0-ra beállítottuk) 30 35 40 szuszpendáljuk. Az így kapott szuszpenziókat 2,5—2,5 ml mennyiségben kémcsövekbe töltjük, majd minden egyes kémcsőbe D-2-fenil-glicin-metilésztert (60 millimól koncentrációban) és az alábbi táblázatban felsorolt 7—ADCA-észterek közül valamelyiket (30 millimól koncentrációban) adjuk, majd a kémcsöveket 60 percen át 37 °C-on tartjuk. A kapott eredményeket az alábbi VI. táblázatban adjuk meg. A 7—ADCA metil-szulfonil-etilészteréből és etil-szulfonil-etilészteréből előállított termékek azonosnak bizonyultak a kémiai úton előállított cephalexin-metil-szulfonil-etilészterrel és cephalexin-etil-szulfonil-etilészterrel. VI. táblázat 7—ADCA-észter (csak az észterező csoportot adjuk meg) Mycoplana dimorpha (IFO—13 213) Protaminobacter alboflavus (IFO—13 221) Pseudomonas melanogenum (IFO—12 020) Pseudomonas maltophilia (IFO—12 690) 7—ADCA-észter (csak az észterező csoportot adjuk meg) A 1 B c A B c A | B c A B c metil-szulfonil-etiletil-szulfonil-etil-H(7—ADCA) + + + + + + + + + 65% 60% 62% >95% >95% >95% + + + + + + + + + 60% 53% 60% >95% >95% >95% + + + + + + + + + 70% 62% 65% >95% >95% >95% + + + + + + 40% 35% 42% >95% >95% >95% 1. A = A termék mennyisége. 2. B = A 7—ADCA-észter mennyiségének csökkenése. 3. C = A cefem-mag összkihozatala. 4. példa 60 Az 1. példában ismertetett módon Xanthomonas oryzae (IFO—3995) és Xanthomonas citri (IFO—3835) mikroorganizmusokat tenyésztünk, majd a 20 ml térfogatú tenyészetekből a sejteket centrifugálás útján elkü- 65 lönítjük. Ezután az elkülönített sejteket 10 ml 0,05 mólos foszfát-pufferoldatban (amelynek pH-értékét előzetesen 6,0-ra állítottuk be) szuszpendáljuk, majd a kapott sejtszuszpenziókat 2,5—2,5 ml-nyi mennyiségben kémcsövekbe töltjük. Az említett pufferoldat 2,5—2,5 ml-nyi mennyiségeiben feloldunk D-2-fenil-glicin-metil-észtert (koncentrációját az oldatban 30 millimólra állítjuk be 7
