171838. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(alfa-fenil-alfa-amino)- acetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav észterek előállítására
15 171838 16 és az alábbi táblázatban felsorolt 7—ADCA-észterekből egyet-egyet (ezek koncentrációját az oldatban 60 millimólra állítjuk be), majd az így kapott oldatokat a kémcsövekbe töltött sejtszuszpenziókhoz adjuk, és a kémcsöveket keverés közben 60 percen át 37 °C-on tartjuk. A 7—ADCA metiltio-metilészterből kiindulva a kapott termék megegyezik a kémiai úton előállított cephalexin-metiltio-metilészterrel. A kapott eredményeket az alábbi VII. táblázatban adjuk meg. A kiindulási anyagként használt 7-amino-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav-metiltio-metilészter hidrokloridjának olvadáspontja 140—145 °C (bomlik). VII. táblázat 7—ADCA-észter (csak az észterező csoportot adjuk meg) Xanthomonas oryzae (IFO—3995) Xanthomonas citri (IFO—3835) 7—ADCA-észter (csak az észterező csoportot adjuk meg) A B c A B c metiltio-metil-H(7—ADCA) + + + + + + 72% 70% >95% >95% + + + + + + 65% 78% >95% >95% 1. A = A termék mennyisége. = A 7—ADCA-észter mennyiségének csökkenése. 2. B £*% JJ / V / ^ii-'^w'i 1-VDÍJlVl iiL\sl±XXjl 1JV{ 3. C = A cefem-mag összkihozatala. A termékként képződött metiltio-metilészter, vagyis a 7-(a-fenil-a-ammo-acetamido)-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav-metiltio-metilészter olvadáspontja 170—175 °C (bomlik). A 7-(a-fenil-a-amino-acetamido)-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav-metiltio-etilészter infravörös spektruma (kálium -bromid pasztillában) 1770 és 1728 cm-1 ; NNR-spektruma (D 2 0-ban felvéve) 2,10 3H(), 2,14 (3H), 7,78 (2H), 3,34 (2H), 4,40 (2H), 5,02 (1H), 5,60 (1H), 5,70 (1H) és 7,56 (5H) p.p.m. 30 5. példa Az Acetobacter turbidans (IFO—3225) 3 napos ferde tenyészetéből vett sejteket egy literes lombikba töltött 35 200 ml B jelzésű táptalajt beoltunk, majd a tenyészetet 48 órán 28 °C-on inkubáljuk. A kapott tenyészetből a sejteket centrifugálás útján elkülönítjük, majd 50 ml desztillált vízben szuszpendáljuk. Az így kapott 50 mlnyi sejtszuszpenzióhoz 50 ml mennyiségű, 160 millimól 40 D-2-fenil-glicin-metilésztert és 80 millimól 7—ADCA-metil-szulfonil-etilésztert tartalmazó vizes oldatot (pH-ja 6,0) adunk, majd a kapott reakcióelegyet keverés közben 30 percen át 37 °C-on tartjuk. Ez idő alatt a reakcióelegy pH-értékét 2 N nátrium-hidroxid-oldat adagolása 45 útján pH 6,0 körül tartjuk. A 30 perces hőkezelés után a reakcióelegy 28,5 millimól terméket tartalmaz (polarimetriásan határoztuk meg). Ekkor a reakcióelegyet lehűtjük, és a sejteket centrifugálás útján elkülönítjük. A felülúszó folyadékfázis pH-értékét 4,5-re beállítjuk, 50 majd a fázist 4 °C-on egy éjszakán át állni hagyjuk. A D-fenil-glicin képződött kristályait kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson 30 °C hőmérsékletet meg nem haladó hőmérsékleten térfogatának egyharmadára bepároljuk. A kapott koncentrátumot 4 °C-on egy 55 további éjszakán át állni hagyjuk, majd a kivált csapadékot centrifugálás útján elkülönítjük, és a kapott felülúszó folyadékfázist Amberlite XAD—2-vel töltött kromatográfiás oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot vízzel eluáljuk, és a termékben dús frakciókat össze- 60 gyűjtjük, majd liofilizáljuk. így 1,2 g poralakú cephalexin-metil-szulfonil-etilésztert kapunk. Tisztasága megközelítőleg 93%. Olvadáspontja 152—154 °C, optikai forgatóképessége [a]D= + 102° (koncentráció: 0,5%, oldószer víz). E} Xm = 260 (260 VCI[L). 65 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az I általános képletű 7-(a-fenil-oe-amido)-acetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsavészterek — ahol n értéke 1 vagy 2, X jelentése —SO mR 3 csoport, ahol R 3 1—3 szénatomot tartalmazó alkilcsoportot jelent, és m értéke 0 vagy 2 — előállítására, azzal jellemezve, hogy a 2-fenil-glicin valamely 1—4 szénatomos alkilészterét és valamely III általános képletű 7-amino-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav-észtert — ahol n és X jelentése a tárgyi körben megadott — egy, az Acetobacter genushoz vagy a Mycoplana dimorpha, Protaminobacter alboflavus, Gluconobacter suboxydans, Xanthomonas citri, Pseudomonas melanogenum vagy Pseudomonas maltophilia specieshez tartozó valamelyik mikroorganizmus vagy pedig a Xanthomonas oryzae IFO—3995 mikroorganizmus, előnyösen Pseudomonas maltophilia (IFO—12690), Pseudomonas melanogenum (IFO—12020), Acetobacter pasteurianus (IFO—3223), Gluconobacter suboxydans (IFO—3130), Acetobacter turbidans (IFO— 3225), Acetobacter xylinum (IFO—3144), Xanthomonas citri (IFO—3835), Xanthomonas oryzae (IFO—3995), Mycoplana dimorpha (IFO—13213), vagy Protaminobacter alboflavus (IFO—13221) mikroorganizmus tenyészete vagy a törzs tenyészetének feldolgozása útján kapott, enzimtartalmú anyag jelenlétében reagáltatjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a reagáltatást 5 °C és 50 °C közötti hőmérsékleten, továbbá pH 4 és pH 8 közötti pH-értéken végezzük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási
