171838. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(alfa-fenil-alfa-amino)- acetamido-3-metil-cef-3-em-4-karbonsav észterek előállítására

171838 10 /. táblázat Xanthomonas oryzae (IFO—3955) Xanthomonas citri (IFO—3835) 7-ADCA-észter (csak az észterező csoportot adjuk meg) Termék mennyisége A 7-ADCA-észter mennyiségének százalékos csökkenése Termék mennyisége A 7—-ADCA-észter mennyiségének százalékos csökkenése benzil± <5% ± <5% bisz-(p-metoxi-fenil)-metil± <5% ± <5% 2,2,2-triklór-etil+ 15% + 12% benzhidril± <5% ± <5% 3,5-dimetoxi-benzil± <5% ± <5% 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzil± <5% ± <5% terc-butil+ 7% + 10% trifenil-metil± <5% ± <5% H(7—ADCA)1 +++ 75% ++ + 80% 1 A reakcióelegyben 1 óra után mérhető adatok. Az összes többi adat 4 órás reakcióidőre vonatkozik. 2. referenciapélda Az alábbi II. táblázatban felsorolt mikroorganizmusok három napos, ferde tenyészeteivel beoltunk 1—1 egy literes lombikba töltött 100—100 ml B jelzésű táptalajt, majd minden egyes beoltott táptalajt rázás közben 28 °C-on 20 órán át inkubálunk, és ezt követően a tenyészetekből a sejteket centrifugálás útján elkülönítjük. Az elkülönített sejteket 100 ml 0,05 mólos foszfát-pufferoldattal (melynek pH-ját előzetesen 6-ra állítot-25 tuk be) mossuk, majd ugyanebből a pufferoldatból 20 ml-rel szuszpendáljuk. Az így kapott szuszpenziókat kémcsövekbe töltjük 2—2 ml mennyiségben, majd a kémcsövekbe az 1. referenciapéldában ismertetett módon D-2-fenil-glicin-metilésztert és különböző, szintén 30 az alábbi II. táblázatban felsorolt 7—ADCA-észtereket adunk. A kapott eredményeket a táblázatban adjuk meg. //. táblázat 7-ADCA-észter Acetobacter Acetobacter Acetobacter Gluconobacter (csak az észterező paste urianus turbidans xylinum suboxydans csoportot adjuk meg) (IFO-3223) (IFO-3225) (IFO-8144) (IFO-3130) A« B3 A2 B8 A2 B3 A2 B3 benzil± <5% + <5% ± <5% ± <5% bisz-(p-metoxi-fenii)-metil± <5% ± <5% ± <5% + <5% 2,2,2-triklór-etil+ 8% + 10% + 7% + <5% benzhidril± <5% ± <5% ± <5% ± <5% 3,5-dimetoxi-benzil± <5% ± <5% ± <5% + <5% 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzil+ <5% + <5% + <5% ± <5% terc-butil+ 6% + 5% + 5% + <5% trifenil-metil± <5% + <5% + <5% ± <5% H(7—ADCA)1 + + + 70% + + + 65% + + + 55% + + 35% 1 A 7—ADCA-ra vonatkozó adatok egy órás reakcióidő, míg a 7—ADCA-észterekre vonatkozó adatok négy órás reakcióidő után mértek 2 A = a termék hozama. 3 B = A 7—ADCA-észter mennyiségének százalékos csökkenése. 3. referenciapélda Az alábbi III. táblázatban felsorolt mikroorganizmu- 60 sok kétnapos, ferde tenyészeteivel egy—egy 1 literes lombikba töltött 100—100 ml C jelzésű táptalajt beoltunk, majd a kapott* tenyészeteket rázás közben 20 órán át 28 °C-on inkubáljuk. Ezt követően a tenyészetekből a sejteket centrifugálás útján elkülönítjük, majd 100 ml, 65 0,005 mólos foszfát-pufferoldattal (amelynek pH értékét előzetesen 6-ra beállítottuk) mossuk, és ugyanebből a pufferoldatból vett 20 ml-ben szuszpendáljuk. Minden egyes szuszpenziót ezután 2—2 ml mennyiségben kémcsövekbe töltünk, és minden egyes kémcsőbe a sejtszuszpenziókhoz az 1. referenciapéldában ismertetett módon D-2-fenil-ghcin-metilésztert és a szintén a III. táblázatban felsorolt 7—ADCA-észtereket adjuk. A kapott eredményeket az alábbi táblázatban ismertetjük. 5