171544. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírus- és baktérium-vakcinák előállítására inaktiválással
9 171544 10 A vírus kezelése j/g 140S-egységek/ml 4 C° inaktiválószer nélkül 7,6 + 0,8 (5 kísérlet) 5 4 C° El, 18 óra 7,8 ± 0,5 (5 kísérlet) 37 C°, EEI, 18 óra 3,8 ± 0,3 (5 kísérlet) 10 A táblázatból kitűnik, hogy a C)-típusú MKS-vírus 37 C°-on etiletiléniminnel 18 órán keresztül végzett inaktiválása során az immunizáló, ép vírus-részecskék fele elpusztul. A 140 S-egységeket félkvantitatíve a kettős im- 15 mundiffúzió módszerével [Lit. Arkiv för Kemi 1, 43 (1949), Progr. in Allergy 6, 30 (1962)] is meghatározzuk. E módszer szerint mérve az ép vírus-részecskék száma 37 C°-on 18 órán át végzett inaktiválás után szintén 50%-kal csökken. 20 Az etiléniminnel végzett kezelés során az immunogén egységek száma nem csökken. A kísérlet azt mutatja, hogy az etilénimin előnyösebb, mint az etiletilénimin, ugyanis azonos inaktiváló hatás elére- 25 séhez az etilénimin esetében lényegesen alacsonyabb hőmérséklet elegendő. 0 A PI-3-vírus (parainfluenza 3, ATCC VR 739) pH 7,5 mellett etiléniminnel, illetve etiletiléniminnel végzett inaktiválása az alábbi titer-idő-összefüggést 30 mutatja (a titer meghatározása primer borjúvesesejteken történik): Időtartam (óra) 0 16 16 35 Hőmérséklete0 4 37 Az inaktiválószer koncentrációja (tf%) - 0,05 0,01 40 titer (El) 7,0 titer (EEI) 7,0 3,0 g) IBR-IPV-vírus inaktiválása. 45 (Az IBR-IPV-vírus a fertőző szarvasmarha rhinotracheitis és fertőző kiütéses vulvovaginitis kórokozója). A fenti vírus BFA, 4-SCh jelű törzsét 4C°-on, illetve 37 C°-on 0,05 tf% etiléniminnel (El), 50 illetve etiletiléniminnel (EEI) inaktiváljuk. A pH érték mindkét esetben 8,3. A kapott eredményeket az alábbi táblázatban adjuk meg. Az inaktiválás 55 időtartama (óra) 0 4 16 Hőmérséklete0 - 4 37 Az inaktiválószer 60 koncentrációja (tf%) - 0,05 0,01 titer (El) 5,5 1,0 titer (EEI) 5,5 4,5 1,0 65 h) A Pasteurella haemolytica baktériumot 20 C°-on különböző koncentrációjú etiléniminnel, illetve etiletiléniminnel pH 8,0 mellett inaktiváljuk. A titer meghatározása véragar-lemezeken történik. Az alábbi értékeket kapjuk: Az inaktiválás időtartama (óra) 0 2 2 6 6 20 20 Koncentráció (tf%) - 0,1 0,5 0,1 0,5 0,1 0,5 Titer (El) 10,1 9,5 7,6 8,1 2,0 4,6 -Titer (EEI) 10,1 9,8 9,6 9,4 8,0 7,6 4,4 Az eredményeket a 7. ábra szemlélteti. i) Az Aujeszky-féle veszettség-vírus Phylaxia törzsét 37 C°-on és pH 7,5 mellett 0,1 tf% etiléniminnel, illetve etiletiléniminnel inaktiváljuk. A titer meghatározása primer sertésvesesejteken történik. Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: Az inaktiválás Titer (EI) Titer (EEI) időtartama (óra) 0 7,5 7,5 1/2 5,7 7,0 1 4,7 6,7 2 !'5 6,3 4 -5,7 8 — 4,5 A görbe lefutását a 8. ábra szemlélteti. A 8. ábrából látszik, hogy az etiletiléniminnel végzett inaktiválás esetében az idő és titer közti összefüggés nem lineáris, tehát nem elsőrendű reakció zajlik le. A teljes inaktiválás időpontjának meghatározása emiatt bizonytalanná válik. j) A Newcastle-disease-virus Italia törzsét pH 8,0 mellett 37 C°-on 0,05 tf% etiléniminnel, illetve etiletiléniminnel inaktiváljuk. A titer meghatározása csirkeembrió fibroblaszton történik. Az inaktiválás Titer (EI) Titer (EEI) időtartama (óra) 0 8,5 8,5 1/2 6,0 7,7 1 4,0 7,0 2 - 6,0 4 - 4,5 8 - 2,0 5
