171544. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírus- és baktérium-vakcinák előállítására inaktiválással
11 171544 12 Ahogy a 9. ábrából kitűnik, az idő és titer közti összefüggés etiletilénimin alkalmazása esetén itt sem lineáris, tehát itt sem zajlik le elsőrendű reakció. Az etiléniminnel végzett inaktiválással ellentétben a teljes inaktiválás időpontjának pontos meghatározása lehetetlen. k) A BVD (Bovine vírus diarrhea = Mucosal disease vírus) Oregon C24Vjelű törzsét 37 C° és pH 7,5 mellett 0,05 tf% etiléniminnel, illetve etiletiléniminnel inaktiváljuk. A titer meghatározása primer borjúvesesejteken történik. Az etilénimines inaktiválás során a titer óránként 5,5 bg nagyságrenddel csökken, míg az etiletiléniminnel kezelt vírus esetén a csökkenés csak 1,2 log nagyságrendet tesz ki. 1) Az egérpneumónia-vírus (a parainfluenza-vírusok egyike) Tübingen törzsét pH 7,5 mellett 37 C°-on 0,05 tf% etiléniminnel, illetve etiletiléniminnel inaktiváljuk. A titer meghatározása baby egereken történik. Az etiléniminnel végzett inaktiválás során a titer óránként 3,5 log nagyságrenddel csökken, az etiletilénimin csak 0,5 log nagyságrendű csökkenést eredményez. m) Az influenza A vírus A°PR 8 (human) nevű törzsét pH 8,0 mellett 37 C°-on 0,1 tf% etiléniminnel, illetve etiletiléniminnel inaktiváljuk. A titer meghatározása baby-hamster-kidney (BHK) sejteken történik. Az etilénimines inaktiválás során a titer óránként 6,0 log nagyságrenddel csökken, míg az etiletiléniminnel kezelt vírus esetén a csökkenés csak 1,5 log nagyságrendet tesz ki. n) A Marék disease vírus FC 126 jelű törzsét pH 8,0 mellett 37 C°-on 0,1 tf% etiléniminnel, illetve etiletiléniminnel inaktiváljuk. A titer meghatározása csirkeembrió fibroblaszton történik. Az etiléniminnel kezelt vírus titere óránként 4,5 log nagyságrenddel csökken, míg az etiletiléniminnel kezelt vírus esetében a csökkenés csak 0,8 log nagyságrendet tesz ki. A 8. példa a)-n) kísérletének kiértékelése során az alábbiakat állapíthatjuk meg: 1. Etilénimin esetén az inaktiválás mindig elsőrendű reakcióként zajlik le, míg az etiletiléniminnel végzett inaktiválás egyes vírusok (például a Newcastle disease vírus és az Aujeszky pszeudoveszettség vírus) esetén nem lineárisan megy végbe. Az inaktiválás időbeni linearitása azonban előfeltétele annak, hogy a fertőzőképesség teljes megszűnésének időpontját biztosan tudjuk meghatározni. 2. A találmány szerinti inaktiválás az inaktiválószerek azonos koncentrációja mellett rövidebb időn belül, illetve alacsonyabb hőmérsékleten végezhető el. Ez igen jelentős, mert a vírusok növekvő hőmérsé lettel és az inaktiválás növekvő időtartamával egy növekvő mértékben instabillá válnak és spont; kisebb, már nem immunizáló részecskékké esnek sz< 5 Etiletilénimint alkalmazva azonos reakcióidő m« lett lényegesen magasabb hőmérsékleten kell dolgo nunk, mint etilénimin esetében (lásd: e' kísérlet), termolabilis MKS-vírust például 24 órás inaktiválá 10 idő esetén etiléniminnel 4C°-on sikerült inaktiváln míg etiletilénimin alkalmazásával 37 C°-os hőmé: séklet volt szükséges. A 37 C°-on végzett inaktiválí során azonban az immunizáló komponens, azaz az é vírusrészecskék 50%-a elpusztul, míg a 4 C°on véj 15 zett etilénimines inaktiválás esetében a vírusrészec kék épek maradnak. 3. A találmány szerinti inaktiválás nagy sebesség igen meglepő. Azonos moláris koncentráció esetén a 20 etilimin kisebb mólsúlyát figyelembe véve az etiléi imin inaktiváló potenciája az etiletilénimin inaktivál potenciájának 1,25-szörösének kellene, hogy legyer tekintettel arra, hogy a reakciósebességek azonc inaktiváló potenciáját feltételezve a mólsúly négyzel 25 gyökének reciprokjaival arányosak, azaz az alábt összefüggés volna érvényes: : : = : — = i,zo . í 30 v^i" VSí^ v^3 VTT ahol El = etilénimin, EEI = etiletilénimin. Azonos moláris koncentráció mellett azonban a 35 etilénimin inaktiváló sebessége 3-5-szöröse az etí etilénimin inaktiváló sebességének, tehát meglepc előre nem várható módon magas. 40 9. példa A 6. példa szerint előállított inaktivált vírus-szusz penziót azonos térfogatú 3%-os alumíniumhidroxid -szuszpenzióval elkeverve 5 ml mennyiségben 3 szarvas 45 marhának adjuk be intramuszkulárisan. Az állatol immunizálódnak. Alkalmazhatóság szempontjából a: ismert vakcinákhoz viszonyítva különbséget nen észlelünk. 50 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás inaktivált vírust- vagy baktériumo tartalmazó vakcinák előállítására, fertőző vírusokbó 55 vagy baktériumokból, azzal jellemezve, hogy oldatbai vagy szuszpenzióban 0,005-2 térfogat% végkoncent rációig 0 C és 45 C° közötti hőmérsékleten, néhánj óra és 2 nap közé eső időn át etiléniminnel kezelünk egy fertőző vírust vagy baktériummal a feleslegei 60 etilénimint adott esetben nátriumtioszulfát-oldatta megontjuk, és az inaktivált vírust vagy baktériumul tartalmazó oldatot vagy szuszpenziót oldószerekké és/vagy közömbös nemtoxikus szilárd, félszilárd vágj folyékony hordozóanyagokkal végzett hígítással 65 adott esetben emulgeáló-és/vagy diszpergálószerek 6
