171544. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírus- és baktérium-vakcinák előállítására inaktiválással
7 171544 8 elegyet a meghatározott inaktiválási hőmérsékleten keverjük, és a megfelelő időtartam elteltével a felesleges inaktiváló anyagot 10 tf-% 20%-os nátriumtbszulfát-oldattal elbontjuk. A próbákat mgftatlanul, illetve tízszeres léptékben hígítva 10-10 szövet- s kultúrás kémcsőbe visszük. A titer meghatározását különböző teszt-rendszerek segítségével .végezzük. Az alábbiakban az egyes mikroorganizmusoknál az alkalmazott teszt-rendszert is 10 megadjuk. Az egyes kísérletekben a fertőző egységek logaritmusa (titer) és a behatás időtartama között fennálló összefüggést határozzuk meg. 15 Egyes inaktiváló kísérletek: a) A C) típusú MKS-vfrus inaktiválását 20 C°-on, pH 8,0 mellett 0,01 tf % etfléniminnel (El), illetve 20 etiletiléniminnel (EEI) végezzük. A titert primer borjúvesesejteken határozzuk meg. Az inaktiválás időtartama (óra) Titer (El) Titer (EEI) 4,5 2,5 (nincs meghatározv 16 A kapott eredményt a 4. ábra szemlélteti. d) A C) típusú MKS-virust 4C°-on, pH 8 mellett 0,5 tf% etiléniminnel (El), illetve etiletilé iminnel (EEI) inaktiváljuk. A titert primer borjúves sejteken határozzuk meg. Az inaktiválás Titer (EI) Titer (EEI) időtartama (óra) Az inaktiválás 25 időtartama (óra) Titer (El) Titer (EEI) 0 8,5 8,5 2 7 8,5 4 4,5 8,0 8 1 7 10 — 4,5 30 35 Az inaktiválás időbeli lejátszódását a 2. ábra mutatja. b) Az A5 -típusú MKS-vírust (Westerwald) 20 C°-on, pH 8,0 mellett 0,01 tf% etiléniminnel (El), illetve etiletiléniminnel (EEI) inaktiváljuk. A titert primer borjúvesesejteken határozzuk meg. Az inaktiválás időtartama (óra) Titer (El) Titer (EEI) 0 4,5 4,5 2 2,0 4,5 4 -4P 8 -2,5 16 — 1,0 45 50 55 A titer és reakcióidő közti összefüggést a 3. ábra szemlélteti. c) Az Oi típusú (spanyol) MKS-vírus inaktiválása 20 C°-on, pH 8,0 mellett. Inaktiváló anyag: 0,01 tf% etilénimin (El), illetve etiletilénimin (EEI)- A titer meghatározását primer borjúvesesejteken végezzük. 60 65 0 8,5 8,5 1 1 7 2 1 6 Grafikus ábrázolás: lásd az 5. ábrát. e) A C)-típusú MKS-vírust 4C°-on 0,03 tf% etiléi iminnel (El), illetve 37 C°-on 0,03 tf% etiletilénimii nel (EEI) inaktiváljuk. A pH-érték mindkét esetbe 8,0. A titer meghatározása primer borjúvesesejteke 40 történik. Az inaktiválás Titer (EI) Titer (EEI) időtartama (óra) 0 8,5 8,5 2 8 7,5 4 6 6 8 4,5 4 10 _ A 6. ábrából kitűnik, hogy ebben az esetben a inaktiválási görbék lefutása közel azonos. e') A hosszú reakcióidők befolyása a vírus tula donságaira. 18 órás inaktiválás után szacharőz-sűri séggradiensen át centrifugálva meghatározzuk az úi „140 S-egységek" mennyiségét, azaz az immunizáli teljes értékű vírus-részecskék mennyiségét. Az alábt eredményt kapjuk: 4
