171384. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív pteridin-származékok előállítására
171384 Elemanalízis: Elemanalízis: számított: C =53,02%, H =6,02%, N =28,11%, talált: C =53,11%, H =6,00%, N =27,86%. 4. példa 2-Amino-4-hidroxi-7,7-dietil-7,8-dihidropteridin-6-karboxaldehid [Az (la) általános képletben RÍ = R2 = etil-csoport.] . 1,1 g 2-amino-4-hidroxi-6-hidroximetil-7,7-dietil-7,8-dihidropteridint [a (Ha) általános képletben R[ = R2 = etil-csoport] 20 ml telített vizes kénessavoldatban szuszpendalunk, majd a szuszpenziót oxigénnel és kéndioxiddal kezeljük, a 2. példában leírtak szerint. Az elegyet leszűrjük vákuumban bepároljuk, a kapott szilárd maradékot 20 ml vízben szuszpendáljuk, 70 C°-ra felmelegítjük, majd nitrogénáramban a 2. példa szerint kezeljük. A szuszpenziót 0C°-ra lehűtjük, szűrjük, ily módon a tiszta cím szerinti vegyülethez jutunk sárga, kristályos anyag alakjában, amely 260 C° felett megsötétedik. Elenanalízis: számított: talált: C =53,02%, N =28,11%, C =53,16%, N = 27,62%. H =6.02%. H =6,01%. 5. példa 2-Amino-4-hidroxi-7,7-di-n-propil-7,8--dihidropteridin-6-karboxaldehid. [Az (la) általános képletben R, = R2 =n-Pr] A 2. példa szerint járunk el 1.3 g 2-amino-4--hidroxi-6-hidroximetil-7,7-di-n-propil-7.8-dihidropteridint [a (Ha) általános képletben R] = R2 = n-Pr] 25 ml telített vizes kénessav-oldatban oldjuk. Az aldehid-kénessavadduktot a 2. példában leírtak szerint tiszta állapotban különítjük el. 0.884 g (68%) cím szerinti vegyületet kapunk, amely 260 C° felett megsötétedik. 6. példa Az (la) általános képletű pteridin antagonista vegyületet oly módon vizsgáljuk, hogy ellenőrizzük a dihidropterinsav (DPtA) bioszintézisében résztvevő enzimekre kifejtett inhibitor hatását. A folyamatban a hidroximetil-dihidropteridin-pirofoszfokináz (HMPPS) és a dihidropteroátszintetáz (a továbbiakban szintetáz) vesz részt. A folyamatot az alábbi egyensúlyok tüntetik fel. számított: 5 talált: 1. HMPPS 15 20 25 55 60 C =56,31%, N =25,27%, C =56,52%, N = 24,98%. Mg2 H =6,86%, H =6,86%, 10 HMPt + ATP * Pt + AMP 2. Szintetáz Mg2+ Pt+pAB DPtA + pirofoszfát a) a HMPPS vizsgálatát oly módon végezzük, hogy ATP- -P32 jelzett foszfát végcsoportját Pt-re visszük át és ezt a folyamatot ellenőrizzük, értékelve a vizsgálati anyagnak a HMPPS-re kifejtett inhibitor hatását. Az (la) általános képletű vegyületeket különféle metabolitokat és enzimeket tartalmazó vizsgálati edényekbe helyezzük. A vizsgálati elegyek az alábbi komponenseket tartalmazzák. I 30 35 40 III IV V 2-amino-4-hidroxi-6-hidroximetil-7,8--dihidropteridin (HMPt) (800 fimó) koncentrációban). HMPPS forrás, ezt E. coli extraktumából kapjuk, a szintetáztól Sephadex G—100-on különítjük el Richey és Brown [J. Biol. Chemc 244 1582-1592 (1969)] módszere szerint. 3 mmól ATP- - P32 0,10 mól ATP semleges 0,02 mól MgCl2 • 6H 2 0 VI 0,1 mól MgCl2 • 6H 2 0 45 VII HMPPS forrás és szintetáz VIII 0,93 -lO"3 mól koncentrációjú vizsgálati vegyület 50 IX 0,4 mmól pAB-CM Az 1—9 vizsgálati edények HMPPS forrást, ATP-t és 0,02 mól MgCl2 -6H 2 0-t tartalmaznak, ezenkívül a 2—9 edények HMPt-t, a 4-9 edények vizsgálati anyagot tartalmaznak. A 10—12 edények HMPPS forrást és szintetázt, jelzetlen APT-t, 0,1 mól MgClj -6H2 0-t és jelzett pAB-t tartalmaznak. Az 1—9 csövekben levő anyagot desztillált vízzel 200 juliterre feltöltjük, 60 percig 37 C°-on inkubáljuk, majd jégre öntjük, 20 (ú, 72,1 mg/ml koncentrációjú/dextróz oldatot és 5 /xliter hexokináz oldatot (2000 egység/ml) adunk a fenti oldathoz, majd az elegyet 15 percig szobahőmérsékleten állni 65 hagyjuk. Minden egyes vizsgálati csőhöz 10 mg 4
