171339. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12-vitamin tartalmú fermentlevek feltárására és sejtmentesítésére
9 171339 10 góljuk, amíg a fentiekben megadott vas(HI)-klorid mennyiséget, illetőleg pH-értéket el nem érjük. A találmány szerinti eljárás egy különlegesen előnyös foganatosítási módja szerint folyamatos üzemben dolgozunk. Folyamatos berendezésként bármely ismert készülékrendszert alkalmazhatunk, amely a fent leírt követelményeknek megfelel, azaz a feltárást, a vas(III)-kloridos koaguláltatást és a vas(III)-hidroxid lecsapást különválasztja és ily módon visszakeveredés nem lehetséges. A folyamatos eljárást egyik foganatosítási módja szerint négy reakcióedényből álló kaszkád rendszerben valósítottuk meg. A reakcióedények kettős falú, hengeres Razotherm üvegből készültek. Magasságuk 21 cm, külső 0-jük 5,5 cm, űrtartalmuk 100 ml. Mind a négy edényt három-három nyakkal és az edények fele magasságában kivezető csonkkal láttuk el. A középső nyakba helyeztük a keverőt, az egyik oldalsó nyakon lépett az edénybe az előbbi; reakcióedényből a részben feltárt fermentlé, a másik nyakon juttattuk az edénybe a reakció indításakor az acetonciánhidrint és a lúgot tartalmazó fermentlevet. A reakcióedény kivezető csonkján keresztül lépett a reakcióelegy a következő edénybe olyan módon kiképzett bevezető csövön keresztül, amely lehetővé tette, hogy az átfolyó reakcióelegy közvetlenül a keverő tengelyéhez jusson, ezáltal elkerültük azt, hogy az elegy az előírt tartózkodási időnél rövidebb idő alatt hagyja el a túlfolyón keresztül az adott reaktort. A fermentlevet 75 C°-os előmelegítőn keresztül szi-5 vattyúval adagoltuk az első kaszkádtagba. Ugyancsak szivattyú segítségével tápláltuk be a feltáráshoz, az agglutináláshoz, valamint a vas(IH)-hidroxid leválasztásához szükséges anyagokat. A folyamatos feltárást három különböző betáplálási 10 sebességnél végeztük, ily módon az átlagos tartózkodási idő 15,5 és 31 perc között változott. A berendezés folyamatos működésének megindulása után kb. 30 percig vártunk, hogy a stacioner állapot beálljon, majd 30 percig, illetve 1 órán át működtettük 15 még a berendezést és az e közben feltárt fermentlevet dolgoztuk fel, a kitermelés megállapítása céljából. 60 g FeCl3 . 6H20 /1 fermentlé alkalmazása esetén a fermentlé minőségétől függetlenül a csapadék mindén esetben jól szűrhető. A szűrlet fenol-kloroform keve-20 rékkel történő kirázhatósága, azaz a fázisok szétválaszthatósága jó. A folyamatos feltárás kísérleti paramétereit és a kapott eredményeket az alábbi táblázatban foglaltuk össze: 1. Táblázat Folyamatos kísérletek kaszkád reaktorban Kezdeti pH Fermentlé betáplálás ml/perc Tartózkodási idő (perc) Szürhetöség Szétválaszthatóság B12 -vitamin tartalom gamma/l Kísérlet száma Kezdeti pH Fermentlé betáplálás ml/perc Tartózkodási idő (perc) Szürhetöség Szétválaszthatóság feltí előtt írás után Feltárás hatásfoka (%}. F. 6. F. 7. 9,08 9,15 7,5 31 jó jó jó jó 33 000 30 000 31610 28 240 95,8 93,1 F. 2. F. 5. F. 16. 8,70 9,27 9,66 10,0 22 jő j° jó jó jó 33 400 32 600 29 000 30 850 34 020 28 690 92,4 104,4 98,9 F. 8. F. 10. 9,02 8,73 15,0 15,5 jó jó jó jó 34 000 30 800 31 600 30 770 92,9; 99,9 A találmány szerinti eljárás előnyei a következőkben foglalhatók össze: 1. az eddig ismert legmagasabb B12 -vitamin tartalmú (mintegy 40 000 gamma/l fermentlé) fermentlevekből egyszeri feltárással és ezt követő vas(III)-kloridos kezeléssel, majd vas(III)-hidroxid lecsapással gyakorlatilag mennyiségileg, veszteség nélkül kinyerhető a B12 -vitamin, 2. dúsított fermentlé feldolgozására is egyaránt alkalmazható, 3. a közismerten legnehezebben feltárható és sejtmentesíthető metántermelő mikropopülációk szeptikus, adott esetben dúsított fermentlevére is kiválóan alkalmas, 4. a feltárt és fenti módon kezelt fermentlé könnyen szűrhető, B12 -vitamint a csapadék nem tart vissza, 5. a szűrt fermentlé mentes mindazon szennyezésektől, amelyek a további feldolgozást, mint például adszorpciós megkötést, vagy a fenol-kloroformos extrakciót zavarná, 6. a művelet gyors és egyszerű, nem kíván semmi 45 speciális berendezést, emelt hőfokon, atmoszferikus nyomáson végrehajtható, 7, a folyamatos üzemvitel könnyen megvalósítható. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi példák szemléltetik anélkül, hogy oltalmi igényünket a 50 példákra korlátoznánk. A példákban megadott, a kiinduláshoz felhasznált, adott esetben dúsított fermentlé, valamint a találmányunk szerint feltárt és sejtmentesített szüredék B12 -vitamin tartalmát az alábbiakban ismertetett analitikai 55 módszerrel határoztuk meg: 400 ml-es pohárba, 100 ml 10 OOOÍ—40000 gamma/l B12 -vitamint tartalmazó fermentlevet mérünk be szoba^ hőmérsékleten 4,0 ml 1%-os nátriumcianid oldatot adunk hozzá és pH-értékét erős keverés közben 20%-os 60 nátrium-hidroxiddal 9 ± 0,2-re állítjuk be. A pH-értékét pH-mérővel ellenőrizzük, Radelkisz OP 800-1/A típusú kombinált üvegelektródot alkalmazunk. Ezután a fermentlevet a 70 C°-os fürdőbe helyezett gömblombikba töltjük, a poharat kevés vízzel utána mossuk, és állandó 65 keverés közben 70 C°-ra melegítjük. A kívánt hőmér-5
