171243. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új dotriakontapeptidamidok előállítására
11 171243 12 Olvadáspont: 165 °C. DS: Rf(45) = 0,68; Rf(kloroform—metanol=9:l)= 0,3% Rf(52)=0,70. d) H—Asn—Thr(tBu)—Gly—OMe - 8,5 g Z—Asn—Thr(tBu)—Gly—OMe-t 210 ml metanolban és 10%-os palládium-csontszén jelenlétében hidrogénezzük. A termék amorf hab. - Olvadáspont: körülbelül 60 °C. • DS: Rf(45)=0,42; R,{52)=0,27. e) Z—Thr(tBu)—Asn—Thr(tBu)—Gly—OMe 7,51 g Z—Thr(tBu)—OSu és 5,55 g H—Asn— —Thr(tBu)—<jly^-OMe 50 ml dimetil-formamidban elkészített oldatát egy éjjelen át 22 °C-on állni hagyjuk és ezután nagyvákuumban szárazra pároljuk. A maradékot etil-acetát és n-butanol (1:1) elegyben oldjuk, 5%-os citromsav-oldattal, 5%-os kálium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd az oldatot szárazra pároljuk és a szilárd anyagot metanol—éter elegyből átkristályosítjuk. Olvadáspont: 145—146 °C. DS: Rj(45)=0,73; Rf(52)=0,75. f) H—Thr(tBu)—Asn—Thr(tBu)—Gly—OMe 2,0 g Z—Thr(tBu)—Asn—Thr(tBu)—Gly—OMe-t 20 ml metanolban a szokásos módon telítésig hidrogénezünk, mellyel amorf, habos terméket kapunk. DS: Rf(45)=0,41; Rj<52)=0,34. g) Z—Gin—Thr(tBu)—Asn—Thr(tBu)—Gly—OMe 5,33 g H—Thr(tBu)—Asn—Thr(tBu)—Gly—OMe-t és 4,95 g Z—Gin—ONp-t 80 ml dimetil-formamidban oldunk, egy éjjelen át 22 °C-on állni hagyjuk, melynél a- képződött pentapeptid már rövid idő után kristályosodni kezd. Az elegyhez ezután 500 ml vizet adunk, 0 °C hőmérsékleten leszűrjük, szárítjuk és a maradékot aceton és acetonitril (1:1) elegyben felkeverve tisztítjuk. A kristályos termék olvadáspontja 220 °C felett van. DS: Rf(100)=0,65; R^kloforom—metanol 8:2) = =0,35;Rf(52)=0,58. h) Z—Gin—Thr(tBu)—Asn—Thr(tBu)—Gly—OH 6,42 g pentapeptid-metil-észtert (gj eljárásból) meler gítés közben 58 ml trifluor-etanolban oldunk, szobahőmérsékleten 25 ml 1 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá és 6 óra hosszat 22 °C hőmérsékleten keverjük. 25 ml 1 n sósav-oldat hozzáadása után az elszappanosított pentapeptid kristályosodni kezd. Az elegyet ezután 50 ml-re betöményítjük, szűrjük és vízzel kloridmentesre mossuk. DS: Rf(52)=0,46; Rf(100)=0,29. i) Z—Gin—Thr(tBu)—Asn—Thr(tBu)—Gly—Val— —Gly—Ala—Pro—NH2 500 mg Z—Gin—Thr(tBu)—Asn—Thr(tBu)—Gly— —OH-t, 335 mg H—Val—Gly—Ala—Ero—NH2-t [Helv. 53, 2135 (1970)] és 105 mg N-hidroxi-szukcinimidet melegítés közben 4 ml dimetil-formamidban oldunk. 202 mg diciklohexil-karbodiimid hozzáadása után a reakcióelegyet négy óra hosszat 40 C C hőmérsékleten ke-5 verjük, majd 100 ml éter és 100 ml petroléter elegyére öntjük és a kocsonyásan kicsapódott anyagot szűrjük. A nyers terméket metanol—víz (85:15) elegyben kétr szeri átoldással tisztítjuk és éterrel kicsapjuk. Olvadáspont: 198—199 °C. 10 DS: Rf(96)=0,41 ;Rf(107) = 0,50, Rf(kloroform—metanol 7:3)=0,35. j) H—Gin—Thr(tBu)—Asn—Thr(tBu)—Gly—Val— —Gly—Ala—Pro—NH2 15 ^ •, Az előbbiekben megadott 3,1 g Z-származékot 120 ml 80%-os trifluor-etanolban, 310 mg 10%-os palládium-csontszén jelenlétében szén-dioxid-abszorpció közben telítésig hidrogénezzük. Szűrés után a szűrletet kö-20 rülbelül 5 ml-re betöményítjük, majd 40 ml víz hozzáadása után egy éjjelen át 0 °C-on állni hagyjuk, miközben a nonapeptid tiszta formában kikristályosodik. Olvadáspont: körülbelül 240 °C (bomlik). DS: Rj<96)=0,20; Rj<107) = 0,32; Rf(70)=0,18 25 k)Z—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)— —Asn—Thr(tBu)—Gly—Val—Gly—Ala—Pro—NH2 517 mg Z—Thr(tBu)—Phe—Pro—OH-t [Helv . 53, 30 2135 (1970)], 410 mg előbbi nonapeptidet és 74 mg N-hidroxi-szukcinimidet enyhe melegítés közben 4 ml trifluor-etanol és kloroform (6:4) elegyben oldunk, illetőleg szuszpendálunk, majd 22 °C-oh 177 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá és 20 óra hosszat ke-35 verjük. A reakcióelegyet ezután szárazra pároljuk, és a maradékot egyszer kloroform és petroléter elegyből kicsapjuk. Az így kapott nyers terméket Craig-extrakcióval metanol, puffer, kloroform, szén-tetraklorid 10:10: :3:5:4 oldószerrendszerben (puffer: 28,6 ml jégecét, 40 19,25 g ammónium-acetát, 960 ml víz) egyenként 5 ml fázistérfogatokkal több mint 420 szakaszban tisztítjuk. A tiszta dodekapeptidet a 135—184 számú. frakciók (rmax =160; K=0,61) szárazra történő bepárlásával és az ammónium-acetát nagyvákuumban, 45 °C-on tör-45 ténő kiszublimálásával, mint amorf port kapjuk. Olvadáspont: körülbelül 195 °C (bomlik). DS: Rj<96) = 0,44; Rj<70)=0,51; Rf (52A)=0,38 /j H—Thr(tBu)—Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)— 50 —Asn—Thr(tBu)—Gly—Val—Gly—Ala—Pro—NH2 504 mg előbbiekben megadott Z-dodekapeptidet melegítés közben 30 ml metanolban oldunk és 100 mg palládium-csontszén hozzáadása után szokásos imódon 55 hidrogénezünk. A szűrlet szárazra történő bepárlása után kapott termék amorf, fehér por. DS: Rf (43C) = 0,25; R f (70)=0,35; Rf(52A)=0,20 m) Z—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—Thr(tBu)— 60 —Phe—Pro—Gin—Thr(tBu)—Asn—Thr(tBu)—Gly— —Val—Gly—Ala—Pro—NH2 479 mg Z—Asn—Lys(Boc)—Phe—His—NHNH2 [Helv. 53, 2135 (1970)] és 4,5 ml dimetil-formamid ol-65 datához — 20 °C-on 378 yi. 3,2 n sósavroldatot (dioxán-6
