171139. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kölcsönös specifikus kötésre hajlamos anyagok kvantitatív meghatározására

7 171139 8 specifikus kötésre hajlamos partnerhez kötött meghatározandó anyag egy részének vagy teljes mennyiségének megkötésére. Közelebbről, a jelzett komponens megkötésének mértéke a mátrix paramétereitől, azaz a mátrixhoz rögzített specifikus kötésre hajlamos partner mennyiségétől, e rögzítés következtében fellépő reakciógátoltság mértékétől és a folyékony minta mennyiségétől, valamint a folyékony mintában a meghatározandó anyag abszolút mennyiségétől vagy koncentrációjától függ. A meghatározandó anyag abszolút mennyiségétől vagy koncentrációjától természetesen eltekintve a fentiekben említett többi paraméter szabályozható és beállítható olyan méréstartományok biztosítására, amelyek megbízhatók a meghatározandó anyag koncentrációjának várható tartományán belül. Rendszerint az említett mátrix-paramétereket úgy állítjuk be, hogy a jelzett komponens mennyiségének 30-50 százaléka megkötődjön és az oszlopban maradjon, miután az oszlopot egy olyan folyadékmintával kezeltük, amely nem tartalmaz meghatározandó anyagot. Ugyanezt a műveletet végezzük azután el a későbbiekben a meghatározandó anyag meghatározására. A találmány értelmében alkalmazott kétfázisos meghatározási módszerhez szükséges egy olyan szilárd fázis, amely az oldhatatlanná tett specifikus kötésre hajlamos partnert tartalmazza. A specifikus kötésre hajlamos partner azáltal válik oldhatatlanná, hogy az oldhatatlan mátrixhoz a specifikus kötésre hajlamos partnert rögzítjük. A mátrix bármely olyan oldhatatlan anyagból készülhet, amely porósus (így a folyékony fázissal hatásos érintkezést biztosít) és képes a specifikus kötésre hajlamos partner megkötésére. Ilyen anyagok lehetnek például a különböző polimerek, gélek, kolloidok és szálas anyagok. A mátrixanyag pórusossága olyan kell hogy legyen, hogy minimális idő alatt lényeges érintkezés történjék a folyékony fázis és a specifikus kötésre hajlamos partner között, vagyis a meghatározandó anyag és a jelzett komponens gyors és hatásos kapcsolatba lépjen a specifikus kötésre hajlamos partner specifikus kötésre képes helyeivel. Az oldhatatlan mátrixhoz a specifikus kötésre hajlamos partner megkötésére számos módszer alkalmazható. Ilyen módszer például a specifikus kötésre hajlamos partner fizikai megkötése. A specifikus kötésre hajlamos partner továbbá először polimerizálható vagy kapcsolható valamilyen anyaghoz először egy konjugátumot képezve, majd a polimerként vagy konjugátumként a mátrixhoz rögzíthető fizikailag. A specifikus kötésre hajlamos partnerekkel konjugátumot képező anyagok közül megemlíthetjük a látexet, a metakrilátokat és baktériumokat. További lehetőség a specifikus kötésre hajlamos partnerek rögzítésére a mátrixhoz abszorbeáltatás. Ez az adszorpció azonban elég erős kell, hogy legyen ahhoz, hogy a specifikus kötésre hajlamos partnereket oldhatatlanná tegye a folyadékminta áramával szemben. A specifikus kötésre hajlamos partnerek vagy ezek valamilyen polimerjének vagy konjugátumának fizikai megkötésére alkalmas mátrixot alkotó anyagok közé tartoznak különböző komplex polimerek, kolloidok és gélek, így például az akrilamid gél. A specifikus kötésre hajlamos partnereket adszorpció útján rögzítő mátrixot alkotó anyagok közé tartozik az 5 aktívszén, az üveg és különböző műanyagok. A specifikus kötésre hajlamos partnereknek a mátrixhoz rögzítésénél a partnerek specifikus kötésre alkalmas helyeit a lehetőséghez képest meg kell védenünk a reakcióképtelenségtől annak 10 érdekében, hogy ezek képesek legyenek a meghatározandó anyaggal és a jelzett komponenssel kötést létesíteni. A pH változásai, a hőmérséklet és más környezeti feltételek befolyásolják a reakcióképes helyek megmaradását, így optimális körül-15 menyeket szükséges biztosítani. Fehérje-típusú anyagokkal, így antigénekkel, hapténekkel, enzimekkel, hormonokkal, receptorokkal és antitestekkel végzett minden reakció esetében a hőmérsékletet a lehető legalacsonyabban, illetve a pH-t a 20 semleges pH-hoz lehető legközelebb szükséges tartani annak érdekében, hogy az irreverzibilis denaturálódás és aggregálódás megelőzhető legyen. Az optimális körülmények az adott specifikus kötésre hajlamos partnertől függnek, tekintettel 25 arra, hogy ezeknek az anyagoknak a szerkezete eltérő. A specifikus kötésre hajlamos partnereknek a mátrixhoz rögzítésére alkalmas egyik előnyös módszer a kémiai megkötés vagy a mátrixhoz 30 kapcsolás. A specifikus kötésre hajlamos partnereknek a mátrixhoz történő kémiai megkötése vagy kapcsolása biztosítja a partnerek rögzítettségét és az e célra választható technikai lehetőségek egyikét képezi. Egy adott specifikus kötésre hajlamos 35 partner esetében a benne levő kémiailag reakcióképes csoportok nagy száma következtében egy megfelelően megválasztott mátrixhoz a kémiai megkötés vagy kapcsolás egyszerű. Kémiai kötés vagy kapcsolás útján specifikus 40 kötésre hajlamos partnereket megkötni képes anyagok közé tartoznak különböző polimerek, gélek, kolloidok és rostos szövetek. A specifikus kötésre hajlamos partnerek kémiailag kötve lehetnek a mátrixhoz közvetlenül vagy egy kémiai 45 kapcsolóreagens útján. A kapcsolóreagenssel előzetesen kezelt mátrixanyag úgy tekinthető, mint egy, a specifikus kötésre hajlamos partner kémiailag reakcióképes helyeivel szemben reakcióképessé tett anyag. A specifikus kötésre hajlamos partnerekben 50 meglevő alapvető reakcióképes csoportok a szabad hidroxilcsoportok, iminocsoportok, szabad tiolcsoportok, guanidinocsoportok, alifás hidroxilcsoportok, metiltiocsoportok, fenilcsoportok, amidocsoportok, diszulfidkötések és peptidkötések. 55 Kapcsolásos reakciókhoz reakcióképessé tehető anyagok közé tartoznak a szálas anyagok, így a cellulóz-származékok, továbbá természetes polimerek, így bizonyos poliszacharidok, valamint szintetikus polimerek. 60 A szintetikus polimerek csoportja. tág választási lehetőséget biztosít a mátrix megfelelő anyagának megválasztásában. Közelebbről előnyösek azok a polimer anyagok, amelyek legalább egy csoportot tartalmaznak a hidroxil-, primer amino- és a 65 szekunder aminocsoport közül. Az ezekhez a