170607. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai vizsgálati lemez

5 170607 6 stroma (sejtfalak). A másik - a 14 jelzésű — teszt-reagens szárított ellenanyag mint, pl. szárított human gonadotrop antiszérum. A teszt-reagensek, vagy —foltok átlagos átmérője kb. 5—15 mm, egymáshoz közel helyezkednek el abból a célból, hogy a vizsgálandó folyadékkal mindkettő nedvesíthető legyen. Kívánatra a 15 bevonat sötét festékkel mint pl. szénfeketével színezhető, azért, hogy kontrasztos színű hátteret biztosítson az eredmények jobb megfigyelésére. Ez a szín eltér az elhatároló kör színétől, hogy ezen utóbbi láthatósága megmaradjon. Egy nem bemutatott alternatív kiviteli változat esetében a vizsgálati reagensfoltok egymásra rétegezhetők. Ilyen esetben ajánlatos a két folt közé közömbös anyagból mint pl. szacharózból vagy ruamitból álló közbenső réteget biztosítani. Ha a szubsztrátum üveg, így a vizsgálati eredményt, esetleg megfelelő nagyítás segítségével könnyen tanulmányozhatjuk. A 2. ábrán olyan kiviteli példát mutatunk be, amelyben az 1. ábra szerinti vizsgálati lemezt a 20 védőtartállyal láttuk el. A tartály védi a vizsgálati foltokat a tárolás alatt és a felhasználás előtt a nedvességtől és szennyezésektől. Bármilyen megfelelő típusú tartály használható, pl. műanyag tasak vagy boríték. A bemutatott kiviteli példánál a tartály a 21 alumíniumfólia-papír-alaplemezből és a 22 fedőlemezből áll, amely legcélszerűbben vékony átlátszó műanyagból készül, s amely oldható kötéssel van az alaplemez ellentétes sarkaihoz — az alumínium-felülethez — erősítve. A fedőlemez hozzáerősítését az alumínium-felülethez a 23 hivatkozási szám mutatja. A 24 fül segíti a fedőlemez lehúzását. A 22 fedőlemez a 25 részen ki van domborítva úgy, hogy magassága megegyezik a szubsztrátum felületével. Ez a kiemelt rész körkörös 26 falhoz csatlakozik, ez pedig a központilag elhelyezkedő körkörös átlátszó 27 lemezhez. A 27 lemez átmérője kb. megegyezik a 12 demarkációs körrel. Nyilvánvaló, hogy a találmány keretén belül kettőnél több folt is elhelyezhető az immunkémiai reakció jellegétől függően. A vizsgálati reagensek előállítását, amelyek a lemezen vagy kártyán a szárított foltokat alkotják, az ezután következő példákban ismertetjük. Egy diagnosztikai vizsgálat így pl. az 1. ábrán bemutatott berendezéssel végzett terhességi próba végrehajtása esetén a vizsgálandó teszt-folyadék pl. vizelet mért mennyiségét mindkét szárított reagens-foltra visszük, vagy a foltok közti területre helyezzük. A két szárított reagenst ezután feloldjuk, vagy szuszpendáljuk a vizeletben. A reagensfoltokat és vizeletet fogpiszkálóval, üvegbottal vagy műanyag keverővel összekeverjük, s így a reagenseket egyetlen foltban egyesítjük. Az így nyert keverékben megy végbe az immunkémiai reakció. A human chorion-gonadotrop hormon jelenlétét vagy hiányát a hordozó részecskék agglutinációja vagy az agglutináció gátlása mutatja. A reakció néhány percen belül lejátszódik. Más típusú immunkémiai reagensek és vizsgálati folyadékok esetében hasonló agglutináció, agglutináció-gátlás vagy precipitáció észlelhető. A vizsgálati lemezek, vagy kártyák készítése céljából a reagenseket illékony, folyékony közegben, előnyösen vizes közegben oldat vagy szuszpenzió formájában állítjuk elő. Ezek az oldatok vagy 5 szuszpenziók adjuváló vagy a reszuszpendálást elősegítő anyagokat is tartalmazhatnak. Azt találták, hogy számos adjuváns elősegíti a szárított reagensek szuszpendálását és ugyanakkor ezek az anyagok elősegítik a szárított reagensnek a vizsgálati lemez 10 felületéhez való szilárd kötését is. Ilyen anyagok pl. a szarvasmarha szérumalbumin (legfeljebb 5 súly/térfogat% optimálisan 1%-os töménységben), laktalbumin hidrolizátum (legfeljebb 5%-os optimálisan 1%-os töménységben), és gumiarabikum (kb. 15 0,5%-os töménységben). Azt találtuk továbbá, hogy amennyiben a szárítandó reagenshez valamilyen cukrot pl. szacharózt vagy mannitot adnak, úgy a reagens száradáskor kemény, üvegfényű felületet nyer, amely megvédi a 2o szárított foltot a letörléstől, vagy mechanikus sérüléstől, s így elősegíti a csomagolást és tárolást. Mint a fentiekben már említettük, a találmány lényeges eleme, hogy a reagensekből pontosan a megfelelő mennyiség kerüljön a lemezre s ezáltal 25 már előzetesen a próba optimális érzékenységét biztosítsuk. Ily módon elkerüljük a szokásos vizsgálati módszerek pontatlanságát, a reagensek cseppentével való szétosztását. Az alábbi példák, amelyek szemléltető és nem 30 korlátozó jellegűek, a különböző teszt-reagensek előállítását mutatják be, különösen azokat, amelyeket terhesség megállapítására használnak. 35 1. példa Latex agglutináció-gátlás 0,1-1,5 mikron (átlagosan 0,5 mikron), szemcse-40 nagyságú hordozóként szolgáló polisztirol latex szemcséket 100 nemzetközi egység/ml töménységű human chorion-gonadotrop (HCG) hormonnal szenzibilizáljuk, borát-pufferben szuszpendáljuk és szarvasmarha szérumalbumint adunk hozzá 1/súly/térfo-45 gat% koncentrációban. A latex szenzibilizálása HCG-vel úgy történik, hogy a latexet először szarvasmarhaszérumalbuminnal kezelik (kb. 90 mikrogram/ml), a keveréket centrifugáljuk és a latexet a HCG oldattal inkubáljuk. A fölös mennyiségű 50 HCG-t centrifugálással és mosással eltávolítjuk, majd a latexet a pufferben szuszpendáljuk. 100 ml latex szuszpenzió előállítására 24 ml 10% HCG-vel szenzibilizált latex szuszpenziót tartalmazó pufferoldatot használunk. A puffer 100 ml vízben az 55 alábbi alapanyagokat tartalmazza, 0,867 g bórsav, 0,2 g NaCl, 0,648 ml 5 N NaOH és 4,0 g szacharóz, a pH-t NaOH-val vagy HCl-el 8,2-re állítjuk. 60 A human HCG antiszérumot úgy állítjuk elő, hogy ' kellő mennyiségű nyúl anti-HCG szérumot (előzetes titrálással meghatározva) az alábbi pufferoldatban oldunk, 100ml-ben 0,4365 g bórsav, 0,1 g 65 NaCl, 0,234 ml 5N NaOH, 6g szacharóz, 0,5 g 3