170560. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil béta-laktám-tipusú antibiotikum-érzékenységi tesztkorongok előállítására
3 170560 4 Az érzékenységi korongok anyaga sima, fehér papír, átmérőjük különböző lehet, kedvelt átmérőméret a 6,35 mm. Szabványpapír esetében a papír súlya 30 + 4 mg/cm2 és a papír saját súlyának mintegy 2-3-szorosát képes desztillált vízből abszorbeálni. A papír nem tartalmazhat olyan anyagot, amely a hozzáadott antibiotikum aktivitását fokozná vagy gátolná, és nem befolyásolhatja az agar-táptalaj vagy az antibiotikum pH-ját. Az összes minőségi előírásnak megfelelő papírfajta a 676 számú alfa-cellulóz papír (forgalomba hozza: Eaton-Dikeman Company, Mount Holly Springs, Pennsylvania). A jelenleg alkalmazott ipari eljárásban a fenti minőségi követelményeknek megfelelő papírlapokat belemártják az antibiotikum-oldatba, a papírt telítik az oldattal, majd kiemelil belőle. A telített lapokból mechanikus préseléssel eltávolítják az antibiotikum-oldat egy részét és az oldatból annyi marad vissza, amennyit a 6,35 mm átmérőjű szegmenseknek az oldószer elpárolgása után az antibiotikumból tartalmaznia kell. A kipréselt lapokat ezután megfelelő hőmérsékleten, például cefalotin esetében 90C°-on szárítják az oldószer eltávolítása céljából és a száraz papírból 6,35 mm átmérőjű korongokat vágnak ki. A vázolt eljárással a korongok kívánt mennyiségű száraz amorf antibiotikummal vonhatók be, ez a mennyiség cefalotin esetében 30 meg. Azt találtuk, hogy a korábbi eljárásokkal előállított (Maktám-típusú antibiotikum-érzékenységi teszt-korongok melegítés és tárolás alkalmával rendkívül instabilak és 37 C°-on történő 90 napi tárolás után antibiotikus aktivitásuknak legalább 2/3 részét elvesztik, aktivitásuk nagyobbik felét a tárolás első 30 napjában vesztik el. Ezért a hatásosság biztosítása céljából az ilyen korongokat a kórházi gyakorlatban lehűtve kell tárolni. Ezért a találmány egyik tárgya olyan (3-laktám-típusú antibiotikum-érzékenységi teszt-anyagok előállítása, melyek teljes antibiotikus aktivitásukat megtartják anélkül, hogy hűtést igényelnének és ezenfelül 37 C°-on való 90 napi tárolás alatt jelentősen stabilabbak, mint a korábbi eljárással előállított érzékenységi teszt-korongok. A találmány további tárgya eljárás kidolgozása hővel és tárolással szemben stabil antibiotikum-érzékenységi teszt-anyagok előállítására, melyek teljes antibiotikus aktivitásukat megtartják 37C°-on való 30 napos tárolás alatt. Azt találtuk, hogy hővel és tárolással szemben stabil, |3-laktám-tipusú antibiotikum-érzékenységi teszt-anyagok —melyek 37C°-on való 30 napi tárolás után sem mutatnak jelentős antibiotikus aktivitás-csökkenést és 37C°-on való 90 napi tárolás után ezen aktivitásuknak legalább 85%-át megtartják - úgy állíthatók elő, hogy az antibiotikum kristályaival abszorbensanyagot vonunk be, amely az antibiotikum számára hordozóként szolgál, az antibiotikummal bevont abszorbens képezi az érzékenységi teszt-anyagot. A találmány szerinti eljárással olyan stabil érzékenységi teszt-anyagot állítunk elő, ahol a ß-laktám-típusú antibiotikum kristályos formában van jelen. A teszt-anyagok előállítására szolgáló új módszer az abszorbensanyagot illékony, oldóhatás nélküli vivőanyagban diszpergált kristályos /J-laktám-típusú antibiotikummal hozunk érintkezésbe, a diszperziót abszorbeáltatjuk és a vivőanyagot el-5 párologtatva az abszorbensen egyenletes és tömör lerakódás formájában marad vissza a kristályos antibiotikum. Előnyösen az így kapott érzékenységi teszt-anyagból állítjuk elő az érzékenységi teszt-korongokat. 10 Abszorbensanyagként a papírt részesítjük előnyben. Az antibiotikum-érzékenységi teszt-korongokhoz használt papír-szabványt az FDA (Food and Drug Administration) állapította meg és a Federal Re-15 gister-ben tette közzé. Az ajánlott papír súlya 26—34 mg/cm2 és a papír saját súlyának 2-3-szorosát képes desztillált vízből abszorbeálni. Mivel a szabvány meghatározásának alapját a papír súlya képezi, a papír vastagságára vonatkozóan nincsenek 20 különleges előírások. Az abszorbeáló képesség alsó és felső határának megjelölése miatt azonban a papír vastagsága nem változhat jelentősen és általában körülbelül 1,5 mm-t tesz ki. A fentiek mellett a papír sima és fehér legyen és nem tartal-25 mázhat olyan anyagokat, melyek a rajta levő /3-laktám-típusú antibiotikum aktivitását fokoznák vagy gátolnák, vagy pH-ját befolyásolnák, vagy pufferhatással rendelkeznének. E követelményeknek a tiszta alfa-cellulóz papír felel meg. Ilyen papírt hoz for-30 galomba az Eaton-Dikeman Company, Mount Holly Springs, Pa. A papírt akár lap, akár tekercs formájában használhatjuk, függően az alkalmazott módszertől, amellyel a papírt az antibiotikum-diszperzióval 35 érintkezésbe hozzuk. A papírra felvitt kristályos |3-laktám-típusú antibiotikum olyan részecskeméretű, hogy valamennyi részecske átmegy a 100 mesh lyukbőségű szitán. Az eddigi gyakorlatban előnyben részesítették a 40 200 mesh részecskeméretet, mivel a kisebb részecskeméret azt jelenti, hogy adott súlyban több részecske van jelen, mint nagyobb részecskék esetében, így az egyes teszt-korongokon több részecske helyezkedhet el, aminek az a következménye, hogy 45 az egyes korongokon a /Maktám-típusú antibiotikum súlya egyöntetűbb. Ezenfelül a kisebb részecskék könnyebben és tovább maradnak szuszpendált állapotban a diszperzióban, mint a nagyobb részecskék, ami ugyancsak elősegíti az egyenlő súlyú 50 antibiotikummal bevont korongok előállítását. Mégis azt találtuk, hogy kielégítően egyenletes 0-laktám-típusú antibiotikum-tartalmú teszt-korongok előállításához nincs szükség ilyen kis részecskeméretre. Az érzékenységi próba végzésénél sem 55 jelent különösebb előnyt, ha a korongon kisebb antibiotikum-részecskék helyezkednek el. 100 és 200 mesh lyukbőségű szitán átbocsátott cefalotin-nátriummal készített teszt-korongokkal párhuzamosan végrehajtott érzékenységi próbában nem ta-60 láltunk különbséget az inhibiciós zónák átmérőjében 37 C°-on történő 24 órás inkubálás után. így a találmány szerinti eljárásban használt 0-laktám-típusú antibiotikum részecskeméretre olyan, hogy az összes részecske átmegy a 100 mesh 65 lyukbőségű szitán. A megfelelő nagyságú részecské-2
