170522. lajstromszámú szabadalom • Eljárás élő legyengített influenza-vírustörzsek és ezeket tartalmazó vírus-vakcinák előállítására
3 170522 4 jellemző, a másikra azonban nem, antigén-összetételük pedig azonos a másik alaptörzsével. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy egy vakcinaként alkalmazható, legyengített, Brigit elnevezésű (ATCC VR 786 számon letétbe helyezett) B-típusú influenza-vírustörzset embriót tartalmazó tyúktojásokon egy B/HK/8/73 jelű vagy B/HK/5/72 jelű (ATCCVR 792, ületve 791 számon letétbe helyezett) patogén B-típusú influenza-vírustörzzsel rekombinálunk, majd a) R 5 jelű rekombináns B-típusú influenza-vírustörzs előállítása esetén a Brigit törzs és a B/HK/8/73 jelű vírustörzs rekombinációjával kapott vírusszuszpenziót anti-Brigit törzs szérumtípusú nyúlszérum jelenlétében héjas allantoisz-üregben tenyésztjük, majd termékként elkülönítjük azokat a vírusokat, amelyek héjas allantoisz-üregben meghatározott fertőzőképessége és szérum-inhibitor-rezisztenciája megegyezik a Brigit-alaptörzsével, vagy b) R 22, illetve R 75 jelű rekombináns B-típusú influenza-vírustörzsek előállítása esetén a Brigit törzs és a B/HK/5/72 jelű vírustörzs rekombinációjával kapott vírusszuszpenziót anti-Brigit törzs szérumtípusú nyúlszérum jelenlétében tenyésztjük, majd R 22 jelű törzsként elkülönítjük azokat a vírusokat, amelyek héjas allantoisz-üregen pozitív fertőzőképességgel rendelkeznek, stabil hemagglutinációt idéznek elő, szérumtípusuk megegyezik a B/HK/5/72 vírustörzsével és hörcsögön nem fejtenek ki antigén hatást, illetve R 75 jelű törzsként elkülönítjük azokat a vírusokat, amelyek héjas allantoisz-üregen pozitív fertőzőképességgel rendelkeznek, stabil hemagglutinációt idéznek elő, szérumtípusuk megegyezik a B/HK/5/72 vírustörzsével és hörcsögön antigén hatást fejtenek ki. A rekombinációs lépésben kiindulási anyagként felhasznált Brigit törzset az American Type Culture Collection gyűjteményben ATCC VR 786 számon helyezték letétbe. A Brigit törzs előállítása során a B/Russia/69 influenza-vírustörzset (ATCCVR 790) embriót tartalmazó tyúktojások allantoisz-üregében, sertésszérum jelenlétében tenyésztették, majd a tenyészetből elkülönítették azt a legyengített, és vakcinaként alkalmazható B-típusú influenza-vírustörzset, amely - szérum-inhibitorokkal szemben teljes mértékben rezisztens, - pozitív héjas allantoisz (AOS)-reakciót ad (a titrálást S. Fazekas de St.Groth és D.O. White ismerteti, J.Hyg. 56, 151-162 (1958)], - menyéteken antigén-hatást fejt ki, mellékhatást azonban nem okoz, - 60 C°-on pozitív hemagglutinin-hőérzékenységgel rendelkezik, és - a juhok vörösvérsejtjeit 30C°-on instabil módon hemagglutinálja. A rekombinációs lépést embriót tartalmazó tyúktojásokon, előnyösen embriót tartalmazó tyúktojások allantoisz-üregében végezhetjük. A rekombináció során második vírustörzsként a B/Hong-Kong/5/72 (ATCCVR791) vagy a B/Hong-Kong/8/73 (ATCC VR792) izolátumot használjuk fel. Az így kapott rekombináns törzseket kívánt esetben kiónozhatjuk vagy többlépéses hígításos sorozattenyésztésnek vethetjük alá. Ezek az utólagos lépések a találmány lényegét nem érintik. 5 A Brigit-törzs (ATCC VR786) és a B/HK/5/72 (ATCCVR791) vagy B/HK/8/73 (ATCC VR792) izolátum rekombinációjával kialakított törzseket a továbbiakban R 22 (ATCC VR788), R5 (ATCC VR787), illetve R 75 (ATCC VR789) törzsin nek nevezzük. Valamennyi törzs B-típusú influenza-vírustörzs. A találmány szerinti eljárással előállított rekombináns vírustörzsek nem patogének, immunogének, 15 és igen előnyösen alkalmazhatók élő B-típusú influenza-vakcinák előállítására. A vakcinákat az élő vakcinák gyártásának szokásos módszereivel állíthatjuk elő és/vagy stabilizálhatjuk. A találmány tárgya tehát továbbá eljárás legalább egy fenti 20 rekombináns influenza-vírustörzset tartalmazó legyengített, B-tipusú influenza vírus-vakcinák előállítására. A találmány értelmében a vakcinákat úgy állíthatjuk elő, hogy a fentiek szerint elkülönített R5, 25 R 22 és/vagy R 75 jelű törzset adott esetben embriót tartalmazó tyúktojások allantoisz-üregében továbbtenyésztjük, majd a kapott vírusanyaghoz kívánt esetben stabilizálószert és/vagy további hatóanyagkomponenst adunk, és kívánt esetben a kapott 30 elegyet fagyasztva szántjuk. A fentiek szerint előállított legyengített influenza vírus-vakcinákat helyileg adagoljuk az orrüregbe. Egy-egy kezelés alkalmával előnyösen lega-35 lább 107 EIDso egységnek megfelelő mennyiségű vírust adunk be, és a kezelést szükség esetén megismételjük. Vakcinás kezelés céljára a vírust előnyösen fagyasztva szárított állapotban tároljuk, és a vakci-40 nát csak közvetlenül a beadás előtt állítjuk elő úgy, hogy a fagyasztva szárított víruskészítményhez vizet vagy bármilyen más ismert, nazálisán beadható készítmények, például cseppek vagy permetek előállításához szokásosan alkalmazott gyógyszerészeti 45 hígítóanyagot vagy kompozíciót adunk. A vakcinás készítmények stabilizálószereket, például peptont, szacharózt vagy más ismert stabilizálószert is tartalmazhatnak. A vakcinák a találmány szerint előállított B-tí-50 pusú influenza-vírustörzsek mellett további hatóanyagként nazálisán beadható A-típusú influenza-vírustörzseket, célszerűen Alice nevű törzset (ATCC VR 776) is tartalmazhatnak. Megjegyezzük, hogy mind az R 22, mind az 55 R75 jelű törzs a Brigit törzs és a B/HK/5/72 törzs rekombinációjával állítható elő a fent ismertetett módon. E két törzs mind szerotípus, mind hemagglutináció, mind AOS titer szempontjából hasonló, csupán annyiban különböznek egymástól, 60 hogy az R 22 (ATCCVR 788) törzs hörcsögön nem vált ki humorális reakciót, míg az R 75 (ATCC VR 789) törzs az említett reakciót kiváltja. A két törzs egymástól véghígításos tenyésztéssel különíthető el. E két törzs antigén sajátságait az 65 alábbi táblázatban hasonlítjuk össze: 2
