170340. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid alkalmazásával
170340 13 14 A lehűtött elegyhez 4 g HONBI-et és 4,2 g DCC-et adunk. Jégfürdőben 1 órán át és szobahőmérsékleten 5 órán át keverjük a reakcióelegyet, amiután szűréssel eltávolítjuk a melléktermékként keletkezett diciklohexilkarbamidot. A dioxánt desztillációval eltávolítjuk, a desztillációs maradékhoz 150 ml vizet adunk, amikor azonnal kristályosodás indul meg. A kristályokat szűréssel elkülönítjük és etanolból újra kikristályosítjuk, így 8,0 g (90,5%-os kitermelés), 188-189 C° olvadáspontú terméket kapunk. Elemanalízis a C23 H 27 0 6 N 3 képlet alapján: számított: C 62,75%; H6,16%; N9,52%; mért: C 62,72%; H6,20%; N9,38%. 11. példa A Z-Asn-Gly-OEt előállítása 40 ml DMF-ban 2,7 g (10 mmólM) Z-Asn-OH-t és 1,4 g (10 mmólM) H-Gly-OEt-HCl-ot oldunk, az oldatot jégfürdőben lehűtjük és 1,4 ml trietilamint és 2 g HONBI-et adunk hozzá. A reakcióelegyet 21 g DCC-vel egészítjük ki. 1 órán át jégfürdőben keverjük a reakcióelegyet, majd a keverést egy éjszakán át szobahőmérsékleten folytatjuk. A melléktermékként keletkező diciklohexilkarbamidot szűréssel elkülönítjük, a szűrlethez kétszeres térfogatú hideg vizet adunk és hűtjük az elegyet. Az eközben kivált kristályos terméket szűréssel elkülönítjük és etanolból kikristályosítjuk, így 3,26 g (kitermelés: 92%), tűkristályos, 184-185 C° olvadáspontú (irodalmi érték 184 C°) terméket kapunk. Elemanalízis a Ci6 H 2 i 0 6 N 3 képlet alapján: számított: C 54,69%; H 6,02%; N 11,96%; mért: C 54,63%; H6,ll%; N 12,04%. 12. példa A (Pyr)Glu-Glu-Ala-NH2 előállítása 60 ml metanolban 1,1 g (5 mmólM) Z—Ala-NH2 -ot oldunk, az oldatot három órán át, 1 g palládium katalizátort használva hidrogénezzük. A katalizátort szűréssel elkülönítjük, a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A száraz desztillációs maradékot és a 2. példa szerinti eljárással előállított Z—(Pyr)Glu— Glu-(OBzl)-OH-t (2,41 g, 5 mmólM) 20 ml tetrahidrofurán és 10 ml DMF elegyében oldjuk, az oldatot 0 C° hőmérsékletre hűtjük. A lehűtött oldathoz 1 g HONBI-et és 1,1 g DCC-et adunk. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd további 6 órán át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet. Ezután a tetrahidrofuránt desztillációval eltávolítjuk. A melléktermékként keletkezett karbamidot szűréssel elkülönítjük, a szűrlethez 50 ml étert és 40 ml etilacetátot adunk, amikor kristályosodási folyamat indul meg. A kristályos terméket szűréssel elkülönítjük és metanolból kikristályosítjuk. így 2,41 g (kitermelés: 87%) Z(Pyr)-Glu-Glu-(OBzl)-Ala-NH2 -t kapunk; olvadáspontja 212-214 C°; [áfö= -27,9° (c = 1,05, jégecetben). Elemanalízis a C^ H32 0 8 N 4 (552,57) képlet alapján: számított: C 60,86%; H 5,84%; N 10,14%; mért: C 60,78%; H5,67%; N 10,16%. Az így előállított Z-(Pyr)-Glu-Glu-(OBzl)Ala—NH2 2 g-ját 40 ml jégecetben oldjuk, az oldatot 5 órán át 500 mg palládium jelenlétében katalitikusan hidrogénezzük. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk, amikor tűkristályokból álló terméket kapunk. Ezt etanollal mossuk, szűréssel elkülönítjük, hideg metanollal ismét mossuk, amikor 1,05 g végterméket kapunk. 5 Elemanalízis a C13 H 20 0 6 N 4 képlet alapján: számított: C 47,55%; H 6,14%; N 17,07%; mért: C 47,17%; H6,ll%; N 17,00%. A papírkromatográfiás vizsgálat szerint a termék 0,37-es Rf-értékkel jellemezhető egyetlen foltot ad, 10 ami pozitív fehérje-reakciót mutat (n-butand-ecetsavpiridin-víz 30:6:20:24 rendszerben) 13. példa A Z-(Pyr)-Glu-His-OH előállítása 15 50 ml dioxán, 40 ml víz és 20 ml DMF elegyében melegítés közben 3,6 g (25 mmólM) H—His-OHHCl-ot és 2,5 g (24 mmólM) vízmentes nátrium-karbonátot oldunk. Azonnal lehűtjük az oldatot és 8,49 g (20 mmólM) Z-(Pyr)-Glu-ONBI-et adunk hozzá. 20 30 percen át jégfürdőben, majd további 4 órán át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet, amiután a dioxánt csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A desztillációs maradékhoz pontosan 24 ml 1 n sósavat adunk, majd etilacetáttal kétszer mossuk. A vizes 25 fázist csökkentett nyomáson körülbelül 20 ml térfogatúra csökkentjük, a sűrítményt egy éjszakán át hűtőben állni hagyjuk. Az oszlopos kristályokból álló terméket szűréssel elkülönítjük és hideg vízzel mossuk, így 6$ g (kitermelés: 86%) anyagot kapunk. A 30 terméket ezután kevés metanolt tartalmazó vízből kikristályosítjuk, így 6,67 g (kitermelés: 78%), 146— 147 C° hőmérsékleten bomlás közben olvadó vegyületet kapunk; [a]p = -6,4° (c = 1,12, metanolban). Elemanalízis a C19 H M 0 6 N 4 • 1,5H2 0- képlet 35 alapján: számított: C 53,42%; H 5,42%; N 13,11%; mért: C 53,50%; H 5,23%; N 13,02%. 14. példa 40 A (Pyr)-Glu-His-Pro-NH 2 (TRH) előállítása 30 ml DMF-ban 2,15 g (5 mmólM), all. példa szerinti eljárással előállított Z-(Pyr)-Glu-His-OH-t oldunk H—Pro-NH2-vei együtt; ez utóbbit úgy állítjuk elő, hogy 1,25 g (5 mmólM) Z-Pro-NH2 -t 50 ml 45 metanolban 1 g palládium katalizátor jelenlétében redukálunk, a katalizátort szűréssel elkülönítjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. Az így elkészített reakcóelegyhez 1 g HONBI-et adunk, majd 0 C° hőmérsékletre hűtjük és 1,1 g 50 DCC-dal egészítjük ki. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet, a melléktermékként keletkező diciklohexilkarbamidot pedig szűréssel elkülönítjük. Ezután erősen csökken-55- tett nyomáson, desztillációval eltávolítjuk a DMF-ot. A desztillációs maradékot 30 ml éterrel alaposan mossuk, az étert eltávolítjuk. A desztillációs maradékot 20 ml kloroformban oldjuk, az oldatot 60 g szilikagélből készült kromatografáló oszlopon kroma-60 tografáljuk. Az oszlopot 300 ml 5% metanolt tartalmazó kloroformmal mossuk, majd kloroform és metanol 4:1 arányú elegyével eluálunk. A 20% metanolt tartalmazó kloroformos eluátumot csökkentett nyomáson desztilláljuk, a száraz desztillációs maradé-65 kot éterrel mossuk és szűréssel elkülönítjük. így fehér 7
