170340. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid alkalmazásával
11 170340 12 majd vízzel mossuk és vízmentes nátrium-szulfáttal vízmentesítjük. A vízmentes oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, amikor desztillációs maradékként kristályos terméket kapunk. A terméket petroléterrel mossuk és etilacetát és petroléter elegyébó'l kikristályosítjuk, így tűkristályos termékként 14,2 g (kitermelés: 100%) súlyú, 125-126 C° olvadáspontú (irodalmi adat: 126 C°) anyagot kapunk; [a]$ = +33,9° (c= 4,7, etanolban). Elemanalízis a C19 H 20 O s N 2 (356,37) képlet alapján: számított: C 64,03%; ; H5,66%; N 7,86%; mért: C 64,01%; H5,72%; N 7,90%. b) Racemizációs kísérlet 10 ml DMF-ban 1,78 g (5 mmólM) Z-Gly-Phe-OH-t és 700 mg (5 mmólM) H-Gly-OEt-HCl-ot oldunk. Az oldathoz 0,64 ml N-etilmorfolint adunk, majd -2 C° hőmérsékletre hűtjük. A lehűtött oldathoz 1,1 g (1,2-szeres egyenértéksúlynyi mennyiség) HONBI-et és 1,1 g DCC-et adunk, majd 1 órán át -2 C° hőmérsékleten, 1 órán át 5 C° hőmérsékleten, végül 6 órán át 20 C° hőmérsékleten keverjük. Ezután 100 ml etilacetátot adunk a reakcióelegyhez. 4%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal, majd 1 n sósavval mossuk. Vizes mosás után vízmentesítés következik, majd csökkentett nyomáson bepároljuk az oldatot. A kristályos desztillációs maradékot petroléterrel mossuk, majd elkülönítjük. így 2,20 g (kitermelés 100%), 113-115 C° olvadáspontú terméket kapunk; [a]p9 -—12,2° (c = 2,0, etanolban). A fentiek szerinti eljárással előállított termék 1,0 g-ját 50 ml meleg etanolban oldjuk, az oldathoz kevés kristályos Z-Gly-DL-Phe-Gly-OEt-t adunk. 1 héten át 2 C° hőmérsékleten állni hagyjuk a reakcióelegyet, eközben DL-triptofán nem válik ki az oldatból. Csökkentett nyomáson 20 ml térfogatúra töményítjük az oldatot, majd 2 CQ hőmérsékletre hűtjük, amikor kristályosodás indul meg. A tűkristályokból álló terméket szűréssel elkülönítve 650 mg, 116—118 C° olvadáspontú anyagot kapunk; [a]$ = -12,5° (c = 2,0, etanolban). A termék egyértelműen optikailag tiszta L-módosulat. A szűrletet csökkentett nyomáson töményítjük, a desztillációs maradékhoz étert adunk, amikor kristályos anyag válik ki az oldatból. A kristályokat szűréssel elkülönítjük, így 170 mg, 116-118 C° olvadáspontú terméket kapunk; [a]p = —12,3° (c = 2,0, etanolban). Az utóbbi lépésben elkülönített vegyület szintén L-módosulat. Teljes kitermelés: 82%. Fentiek alapján nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti eljárás során racém módosulatok nem keletkeznek. Ha az előzőekben ismertetett eljárást HONBI jelenléte nélkül végezzük, úgy a Z-Gly-DL-Phe-Gly—OEt 7,05%-os kitermeléssel keletkezik, a reakció pedig 86%-os. 9. példa Racemizációs kísérlet a Z-Phe—lie—Gly-OBzl előállításával a) A Z—Phe—lie—OH kiindulási vegyület előállítása 40 ml tetrahidrofurán és 20 ml etilacetát elegyében 6,0 g (20 mM) Z-Phe-OH-t és 3,6 g HONBI-et oldunk, az oldatot lehűtjük és 4,4 g DCC-et adunk hozzá. Jégfürdőben 30 percen át, majd szobahőmérsékleten egy órán át keverjük a reakcióelegyet. A melléktermékként keletkező karbamidot szűréssel elkülönítjük, a szűrletet csökkentett nyomáson bepá-5 roljuk, a száraz desztillációs maradékot 20 ml tetrahidrofuránban oldjuk, az oldatot lehűtjük. 30 ml DMF és 22 ml 1 n vizes nátrium-hidroxidoldat elegyében 2,88 g (22 mmólM) H-Ile-OH-t oldunk, az oldatot lehűtjük és fenti Z-Phe-ONBI-et 10 tartalmazó oldatot hozzáadjuk. Jégfürdőben egy órán át, majd szobahőmérsékleten 6 órán át keverjük a reakcióelegyet. Ezt követően 30 ml 1 n sósavat és 60 ml telített vizes nátrium-klorid-oldatot adunk hozzá. Háromszor, egyenként 100—100 ml etilacetáttal ext-15 raháljuk az elegyet. Az egyesített etilacetátos fázist vízzel kétszer mossuk, vízmentesítjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A desztillációs maradékként kapott kristályos terméket petroléterrel mossuk, etilacetát és petroléter elegyéből kikristályosítjuk, így 20 7,80 g (kitermelés 94%) tűkristályokból álló anyagot kapunk; olvadáspont: 152-154 C°; [a$ = -1,6° (c = 1,06, etanol). Elemanalízis a C23 H28 0 5 N 2 (412,47) képlet alapján: 25 számított: C 66,97%; H 6,84%; N 6,79%; mért: C 66,95%; H 6,89%; N 6,79%. b) A Z-Phe-Ile-Gly-OBzl előállítása (racemizációs kísérlet) 20 ml DMF-ban 1,03 g (2,5 mmólM) Z-Phe-Ile-30 OH-t és 840 mg (2,5 mmólM) H-Gly-OBzl-p-toluolszulfonátot oldunk, az oldathoz 0,32 ml (2,5 mM) N-etilmorfolint és 540 mg (1,2-szeres egyenértéksúlynyi) HONBI-et adunk. Jégfürdőben lehűtjük az elegyet és 600 mg DCC-et adunk hozzá. Ezután 2 órán 35 át jégfürdőben hűtve, majd 4 órán át szobahőmérsékleten keverjük a reakcióelegyet, amiután 100 ml vizet adunk hozzá. Kétszer, 80-80 ml etilacetáttal extraháljuk a reakcióelegyet, az etilacetátos fázisokat elkülönítjük és 4%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal, 40 majd 1 n sósavval mossuk. Vizes mosás után vízmentesítjük a szerves oldószeres oldatot és csökkentett nyomáson bepároljuk. A kristályos desztillációs maradékot petroléterrel mossuk és szűréssel elkülönítjük, így 1,52 g súlyú terméket kapunk, kitermelés 100%. 45 Ezt a terméket 5,7 n sósavval 110 C° hőmérsékleten 20 órán át az aminosav-analízisre hidrólizáljuk. A termék aminosav-összetétele a következő: fenilalanin: 0,96 allo-izoleucin: 0,0048 izoleucin: 0,98 glicin: 1,00 50 A fenti eljárással előállított reakcióelegyben a D-módosulat mennyisége 0,7%-nál kisebb. Másrészről, a fentihez hasonló, de HONBI nélkül kivitelezett reakcióban 1,28 g (kitermelés: 84%) végterméket kapunk, aminek aminosavösszetétele: 55 fenilalanin: 0,93 allo-izoleucin: 0,34 izoleucin: 0,62 glicin: 1,00. A termék előállításakor 30%-nyi mennyiségű D-módosulat keletkezik. 60 10. példa A Z-Glu-Ala-OBzl előállítása 30 ml dioxán és 40 ml DMF elegyében 5,6 g (20 mmólM) Z-Gln-OH-t és 7,05 g (20 mmólM) HAla—OBzl-p-toluolszulfonátot oldunk, az oldathoz 65 2,8 ml trietilamint adunk, majd jégfürdőben lehűtjük. 6
