170334. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok tenyésztésére
170334 9 10 2. táblázat 1. oldal 2. oldal Antibiotikum Mikroorganizmus MU FG YL EN Kloramfenikol s s s s Eritromicin s s s s Szulfafurazol r s s s Novobiocin r s ss Oleandomicin r s s r Penicillin G r s s r Sztreptomicin s s s s Tetraciklin ns s s ns Cefaloridin r s s r Kanamicin r s s s Szulfametoxazol/Trimetoprim r s s s Ampicillin r s r r Nalidixinsav s r s s Linkomicin r s s r Furazolidon s r s s Nitrofurantoin s r s s Meticillin r s s r Neomicin s s s r Oxitetraciklin s s s s Fuzidinsav r s s r Kloxacülin r s r r Kolisztin metán szulfonát r ns ns s Polimixin r s s s Karbenicillin ns s s r Gentamicin s s s s r = rezisztens; s= érzékeny; ns = nagyon érzékeny 10 (ii) EN jelű mikroorganizmus végső os = 2,05 (iii) nincs mikroorganizmus végső os = 0 MU,FG,YL,GRjelű mikroorganizmusok keveréke végső os = 0,55 MU,FG,YL,GRjelű mikroorganizmusok keveréke végső os = 0,06 3. példa A JMS 72 jelű vegyes tenyészet metanolt hasznosító, EN jelű mikroorganizmusával végzett kísérletek (a) A kísérletet H alakú csőben végezzük, amelyet a cső vízszintes részébe helyezett dialízis-membránnal két részre osztunk. A cső mindkét részét 25 mlDCR2 táptalajjal és 0,2% metanollal töltjük meg. Három egyedi kísérletet végzünk, amelyekben a cső egyik részét (i) és (ü) EN jelű mikroorganizmussal oltjuk be, illetve (iii) oltóanyagot nem használunk, és a cső másik részét (i) nem oltjuk be, illetve (iii) és (ii) MU, FG, YL és GR jelű, metanolt nem hasznosító mikroorganizmusok keverékével oltjuk be. Minden egyes kísérletben a készüléket rázógépen 42 C°-on inkubáljuk. Az egyes kísérletekben meghatározott optikai sűrűségértékeket a 3. táblázatban közöljük. 3. táblázat 1. oldal 2. oldal (i) EN jelű mikroorganizmus végső os = 1,7 nincs mikroorganizmus' végső os = 0 15 os = optikai sűrűség Az adatokból látható, hogy a legnagyobb mértékű mikroorganizmus-növekedés akkor lép fel, ha az EN jelű mikroorganizmust a metanolt nem hasznosító MU, FG, YL és GRjelű mikroorganizmusok keveré-20 kével érintkeztetve tenyésztjük. Az eredmények azt is jelzik, hogy az EN jelű mikroorganizmus által termelt anyag átdiffundál az elválasztó membránon, és ezt az anyagot az MU, FG, Yl és GR jelű mikroorganizmusok hasznosítják. 25 (b) (i) A metanolt hasznosító EN jelű mikroorganizmus tiszta tenyészetét 500 ml DCR2 táptalajt és 0,1 térfogat%, C14 izotóppal jelzett metanolt tartalmazó rázólombikban tenyésztjük. A lombikokat 2,5 cm pályasugarú forgó rázógépen, 200 fordulat/perc 30 sebességű forgatással 42 C°-on inkubáljuk. A tenyésztés alatt esetlegesen fejlődött szén-dioxidot a lombikra illesztett, nátrium-hidroxid-pasztillákkal töltött csőben adszorbeáltatjuk. 2 napos inkubálás után a tenyészet optikai sűrűsége már nem változik, ami azt 35 jelenti, hogy a növekedés befejeződött. Ekkor a tápfolyadékban nem észleltünk metanolt. A tenyészetet 10 000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk, és a felső folyadékfázist szűréssel sterilizáljuk. (ii) 100 ml így kapott felső folyadékfázist 1,0 ml 40 JMS 72 jelű tenyészettel oltunk be, és a tenyészetet a fenti módon rázólombikokban inkubáljuk. Mindkét lépésben (a) kezdetben, (b) a termelődött sejtek-45 ben, (c) a tenyésztés végén a felső folyadékfázisban, és (d) a termelődött széndi-50 oxidban meghatározzuk a C14 szénatom jelenlétének tulajdonítható radioaktivitást. Minthogy a (ii) lépést metanol távollétében végezzük, az ekkor fellépő mikroorganizmus-növekedés 55 kizárólag a JMS 72 jelű vegyes tenyészet metanolt nem hasznosító mikroorganizmusainak tulajdonítható. Az eredményeket a csatolt (A) folyamatábrán mutatjuk be. Az eredményekből nyilvánvaló, hogy a metanolt 1 60 nem hasznosító baktériumok növekedése a teljes biomassza-termelés fokozódását eredményezi. A kísérlet azt is igazolja, hogy a metanolt nem hasznosító mikroorganizmusok szénforrás-szubsztrátumként hasznosítják a metanolt hasznosító mikroorganizmus 65 által termelt anyagot. 5
