170264. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az S-adenozil-L-metionin szulfonsavsóinak előállítására
170264 7 8 1. példa Schlenk módszerével [Enzymologia, 29, 283 (1965)] SAM-ban feldúsított élesztőből [6,88 g/kg SAM-ot tartalmaz] 90 kg-hoz 11 liter etil-acetátot és 11 liter vizet adunk szobahőmérsékleten. 30 percen át végzett energikus keverés után a keverékhez 50 liter 0,35 n kénsavoldatot adunk, majd a keverést másfél órán át folytatjuk. Szűrés és a kiszűrt anyag vizes mosása után 140 liter oldatot kapunk, amely 4,40 g/liter koncentrációban tartalmaz SAM-ot (ez megfelel a kiindulási anyagban található SAM 99,5%-ának). Az oldathoz ezután keverés közben 2,3 kg pikrolonsav 25 liter metil-etil-ketonnal készült oldatát adjuk, majd a keveréket egy éjszakán át állni hagyjuk és a kivált csapadékot centrifugálással elkülönítjük, ezután pedig vízzel mossuk. A csapadékot ezt követően szobahőmérsékleten keverés közben feloldjuk 6,2 liter 1 n metanolos metán-szulfonsav-oldatban, majd a kapott oldatból a nyomnyi mennyiségű oldhatatlan anyagot kiszűrjük és a szűrlethez 50 liter acetont adunk. A képződött csapadék tökéletes kiülepedése után a fölötte levő folyadékfázist dekantáljuk és az oldhatatlan maradékot kis mennyiségű acetonnal mossuk. A maradékot ezután feloldjuk 25 liter 0,25 n metanolos metán-szulfonsav-oldatban, majd az oldathoz aktív szenet adunk és szűrjük. A szűrlethez ezt követően 125 liter metil-izobutil-ketont adunk, amikor is csapadék válik ki. így 1089 g kristályos és könnyen szűrhető sót kapunk, amely 20%-nál nagyobb mennyiségben oldódik vízben színtelen oldatot képezve. A só ugyanakkor csak kevéssé oldódik a szokásosan használt szerves oldószerekben. Az Anal. Biochem., 4, 16—28 (1971) helyen ismertetettekkel összhangban elvégzett vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat tanúsága szerint a termék mentes bármely szennyeződéstől. Analitikai adatait az I. táblázatban közüljük. Ezek tanúsága szerint a vegyület tapasztalati képlete ClsH 2 3N 6 Os,S-4CH4 0 3 S. Az új sót azonosítottuk továbbá azzal az enzimatikus módszerrel, amely nikotin-amid és guanidinoecetsav 'SAM-mal végzett enzimatikus metilezésén alapszik [lásd: Cantoni, G. L.: J. Biol. Chem., 189, 745 (1951), valamint De La Hóba, G., Jameison, B. A., Mudd, S. H. és Richards, H. H.: J. Am. Chem. Soc, 81,3975(1959)]. Pontosan az előzőekben ismertetett módon eljárva, de n-dodekánszulfonsavat és 1-n-oktadekánszulfonsavat használva CiS H 23 N 6 O s S • 4C M H*; 03S, illetve C1S H 23 N 6 O s S • 4Ci8 Has 0 3 S tapasztalati képletű sókat kapunk, amelyek analitikai adatai szintén az I. táblázatban vannak megadva. 2. példa Az 1. példában ismertetett kiindulási anyagból az ott ismertetett módon kapott, élesztősejtek elbomlásából származó odlatból 70 literhez 1,15 kg pikrolonsav 10 liter izobutanollal készült oldatát adjuk, majd — miután a keveréket egy éjszakán át állni hagytuk -a képződött csapadékot centrifugális útján elkülönítjük. A csapadékot ezután szobahőmérsékleten keverés közben feloldjuk 3,1 liter 1 n etanolos etánszulfonsav-oldatban, majd a kis mennyiségű oldhatatlan anyagot kiszűrjük és a szűrlethez 25 liter dietil-étert adunk. A kapott keveréket állni hagyjuk, majd a kivált csapadékot kiszűrjük és kis mennyiségű dietiléterrel mossuk. A csapadékot ezt követően feloldjuk 12,5 liter 0,25 n etanolos etánszulfonsav-oldatban, 5 majd az oldathoz színtelenítő aktív szenet adunk. Az így kapott keveréket szűrjük, majd a szűrlethez 63 liter benzolt adunk. 585 g só csapódik ki, amelyet kiszűrünk és szárítunk. A só több mint 20% mennyiségben oldódik vízben, míg a szokásosan hasznait 10 szerves oldószerekben gyengén oldódik. Az 1. példában ismertetett módon végzett vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat tanúsága szerint mentes bármiféle szennyeződéstől. Analitikai adatait az I. táblázatban adjuk meg. Ezek tanúsága szerint tapasztalati képlete 15 CIS H 23 N 6 O s S-4C 2 H 6 0 3 S. Az új sót az 1. példában említett enzimatikus módszerrel is azonosítottuk. Pontosan a fentiekben ismertetett módon eljárva, de 2-bróm-etánszulfonsavat és 2-klór-etánszulfonsavat 20 használva az alábbi tapasztalati képletű sókat kapjuk: C1S H 23 N 6 0 S S • 4C 2 H 5 S0 3 Br, illetve C 1S H 23 N 6 -0S S-4C 2 H S S0 3 C1. A sók analitikai adatait az I. táblázatban adjuk meg. 25 3. példa Az 1. példában ismertetett kiindulási anyagból az ott ismertetett módon kapott, élesztősejtek elbomlásából származó oldatból 70 literhez 1,15 kg pikrolon-30 sav 12 liter n-butanollal készült oldatát adjuk, majd -miután a keveréket egy éjszakán át állni hagytuk - a képződött csapadékot centrifugálás- útján elkülönítjük. A csapadékot ezután szobahőmérsékleten keverés közben feloldjuk 3,1 liter 1 n 1-propanolos DL-10-35 kámforszulfonsav-oldatban, majd a kapott oldathoz 25 liter benzolt adunk. Az ekkor kivált csapadékot elkülönítése után feloldjuk 12,5 liter 0,25 n 1-propanolos kámforszulfonsav-oldatban, majd az oldathoz színtelenítő aktív szenet adunk. Az így kapott keveré-40 ket szűrjük, majd a szűrlethez 63 liter acetont adunk. 928 g só csapódik ki. A só több mint 20% mennyiségben oldódik vízben, ugyanakkor szokásosan használt szerves oldószerekben csak rosszul oldódik. Az elvégzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat 45 tanúsága szerint mentes bármiféle szennyeződéstől. Analitikai adatait az I. táblázatban adjuk meg. Ezek tanúsága szerint tapasztalati képlete: Ci5 H 23 N 6 O s S •4C10 H 16 O 4 S. A só azonosítható az 1. példában ismertetett 50 enzimatikus módszerrel is. A fentiekben ismertetett módon eljárva, de D-3-bróm-kámfor-10-szulfonsavat használva, a C15 H 23 N6 O s S. • 4CioHiS 0 4 SBr tapasztalati képletű sót kapjuk, amelynek analitikai adatai az 1. táblázatban 55 láthatók. 4. példa A specifikus enzim tisztítása 50 ml darabos Sepharose-t (a Pharmacia Fine 60 Chemicals Ab, Uppsala, svédországi cég által előállított poliszacharid) vízben szuszpendálunk, majd ismert módon brómciánnal kezeljük abból a célból, hogy a poliszacharid-gélhez aminocsoportokat tartalmazó vegyületeket kovalensen kötni lehessen. Az így • 65 kapott gélhez ezután fölöslegben vett L-lizint adunkj 4
