170149. lajstromszámú szabadalom • Eljárás parvulin-antibiotikumok kinyerésére és tisztítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1975. III. 17. (GO-1304) Közzététel napja: 1976. XI .27. Megjelent: 1978.11.24. 170149 Nemzetközi osztályozás: C 12 D 13/06 C 07 G 11/00 Feltaláló: dr. Gyimesi József, oki. vegyész, 18%, dr. Láng Tibor, oki. vegyészmérnök, 16%, dr. Balogh Tibor, oki. vegyészmérnök, 8% dr. Hegyaljai Kiss Géza, oki. vegyész, 8%, Horváth Márta, vegyésztechnikus, 8%, Kádár Istvánné, oki. vegyészmérnök, 8%, Ott István, biológus, 8%, dr. Tóth-Sarudy Éva, oki. vegyész, 8%, Turóczi Ferenc, vegyésztechnikus, 8%, dr. Száva József, oki. vegyészmérnök, 5%, Tomori Lászlóné, oki. vegyész, 5%, Budapest Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás parvulin-antibiotikumok kinyerésére és tisztítására A találmány tárgya uj eljárás parvulin-antibiotikumok kinyerésére erjesztéses oldatbál kalcium-só alakjában és/vagy tisztítására parvulinsav- vagy - sók oldása, majd az oldatból való kicsapása utján. Ismeretes, hogy a parvulinok főleg Gram-pozitiv kórokozók ellen hatásos, savas jellegű lipopeptid antibiotikumok. Termelésüket és előállításukat a 157 984 sz. magyar, illetve a 3 798 129 sz. USA szabadalmi leirások ismertetik. Szerkezetük alapján az -amfomicin-aszpartocin-csuzimicin csoportba sorolhatók, de azoktól eltérőek. A pontos kémiai-szerkezeti felépités tisztázása jelenleg is folyik. A parvulinok és a rokon amfoter antibiotikumok izolálása azon alapszik, hogy oldhatóságuk vizben a 3,5 pH körüli izoelektromos ponton a legkisebb. Alkalikus pH-n sók képződnek, melyek közül az alkálifém- és ammóniumsók jól oldódnak vizben, mig az alkáli-. ' földfém-sók rosszul. A szabad parvulinsavak alkoholokban jól oldódnak, pl. butanollal az izoelektromos pont körüli pH-n kivonhatók. Utóbbi oldószerből alkalikus pH-n vizbe átvihetők, amely körülmény az izolálásra felhasználható. A parvulin-savak az alkoholoknál kevésbé poláris, oldószerekben pl. etil-acetátban, rosszul oldódnak. Minthogy a parvulinok szabad amino-csoportot is tartalmaznak, ásványi savakkal is sókat képeznek, azonban 3,5 pH alatt fokozatosan bomlás következik be. Az antibiotikumok emiitett csoportja néhány tagjának izolálására a következő eljárások ismeretesek. Az 1 8oo 363 sz. NSZK közrebocsátási iratban ismertetett eljárás szerint a csuzimicin antibiotikum erjesztéses oldatát alkalikus pH-n szűrik; a szürletben található az antibiotikum, mig a kiszűrt micéliumot nem hasznosítják. A szürlet pH-ját az izoelektromos pontra állitják be, és a • csuzimieint butanollal extrahálják. Az igy 170149 kapott oldatot etil-acetáttal kicsapják, és a kivált nyers antibiotikumot szabadsav formájában szűréssel elkülönítik. A másik változat szerint a butanolos extraktumból al-5 kálikus pH-ju vizzel kivonják az antibiotikumot, majd a vizes oldatot az izoelektromos pontnak megfelelő pH-ra állitva kiválik a csuzimicin. A 157 984 sz. magyar szabadalmi leirás 3. példájában megadott eljárás szerint a par-10 vulinok izolálásánál ugy járnak el, hogy az erjesztéses oldatot az izoelektromos pont körüli pH-n /3,4-3,6/ szűrik, aminek következtében az antibiotikum-elegy a micéliumra kiválik, és a szürlet elönthető. A nedves micéliumról a parvulinokat acetonnal von-15 ják ki, majd a kivonatot betöményitik, és 3,4-3,6 pH-n a parvulinokat butanollal extrahálják. Az igy kapott oldatot vizes nátrium-hidrogénkarbbnát-oldattal, majd savas pH-n ismét butanollal extrahálják. Közben egyre töményebb oldatokhoz jutnak, végül a 2o butanolos koncentrátumból etil-acetáttal .csaßjak ki az antibiotikum-elegyet. Az idézett szabadalmi leirás 4. példája szerint a micéliumra leválasztott parvulinokat me•• tanollal vonják ki. A csökkentett nyomáson alkohol-mentesitett vizes kivonathoz 7,o-25 es P H_n telitett vizes kalcium-klorid-oldatot adagolnak /25 ml telitett kalcium•-klorid-oldatot 1 liter süritményre/, és a kalciumsó alakjában leválasztott parvulinokat szűrik, majd vizzel és acetonnal mosj sák. Ily módon 54 #-os hozamot érnek el /a 3Q ífermentlé parvulln tartalmára számítva/. Az izolálási hozam növelésére irányuló vizsgálataink során azt a meglepő megfijgyelést tettük, hogy noha a számítottnál ;mintegy lo-15-ször nagyobb kalcium-klorid ilecsapószer mennyiség nem növeli a hozamot, 35 a parvulinokat az erjesztéses oldat szürle-
