170004. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükóz-izomerán enzim előállítására

9 170004 10 5. törzs Morfológia: a spóratartók szinpodiális elágazásúak, az egyes ágak 2-7 kanyarulatból álló, dugóhúzószerű spirálban végződnek. A spórák fénymik- 5 roszkóposan vizsgálva sima falúak, gömbölydedek vagy ellipszoid alakúak, 0,6 - 0,9 x 0,9 - 1,1 ju méretűek. Szacharóz-nitrát agáron a növekedés igen erőteljes és gyors, bivalybarna színű, a légmicélium 10 vastag, totális fedettségű, egérszürke nagy színtelen izzadságcseppeket sűrűn visel, a táptalaj micélium sötétszürke, 2-3 mm mélyen kúszik az agárba, igen enyhe sárga oldható pigment észlelhető. 15 Tirozin agáron melanin negatív. A légmicélium egérszürke, a táptalaj micélium fehér, oldható pigment nem keletkezik. Tápagaron a növekedés sárgás, a légmicélium gipszes szerkezetű, fehér, a táptalaj micélium kom- 20 pakt, ráncos, kissé sárgás, mélyen az agárba kúszik, oldható pigment nem képződik. Glükóz-aszparagin agáron a telepek közepén a légmicélium világosszürke, szélük koncentrikus raj- 25 zolatú, szürkésbarna. A táptalaj micélium krémszínű, oldható pigment nem képződik. Bouillon agáron a növekedés matt, viaszos, színtelen, a légmicélium 3—4%-os fedettségű, fehér, pontszerűen jelenik meg. A táptalaj micélium az 30 agar világosbarna színét veszi át, oldható pigment nem keletkezik. Burgonya-glükóz agáron a telepek a táptalajból magasan kiemelkednek, a légmicélium fehér, 1 hét után megszürkül, a táptalaj micélium oldalirányban 35 messze bekúszik, sárga, az oldható pigment alig észlelhető sárga. v Kukoricaliszt agáron a telepek az első néhány napon alig növekednek, később a sötétszürke légmicélium és a krémszínű táptalaj micélium 5-6 mm 40 távolságra növekszik. Oldható pigment nem keletkezik. Sabouraud-glükóz (glükóz-pepton) agáron kis területű, de erősen ráncos szerkezetű. A légmicélium fehér, a táptalaj micélium színtelen, oldható pig- 45 ment nem keletkezik. Glicerin-nitrát agáron a növekedés erőteljes, bivalybarna, a légmicélium vastag, poros, színtelen izzadságcseppeket sűrűn visel, középen egérszürke, 50 szélen olajszürke színű. A táptalaj micélium kompakt, sárgásszürke, az oldható pigment alig észlelhető, sárga. Löffler-féle alvasztott savótáptalajon a növekedés gyors, kompakt, színtelen, proteolitikus aktivitás 55 nem észlelhető. Cellulóz, mint egyetlen szénforrás: növekszik. Zselatin folyósítás: igen gyenge. Burgonyaszeleten a telepek sűrűn ráncosak, a légmicélium egérszürke, fehér pontokkal, a táptalaj- 60 micélium színtelen, jól fejlett, oldható pigment nem keletkezik. Véres agáron a légmicélium hamuszürke, a táptalajmicélium messze szétkúszó, hemolízis nem észlelhető. 65 Szénforrás asszimiláció (Czapek apaion): D-glükóz: + D-szorbit: + D-galaktóz: + keményítő: + szacharóz: ++ D-xilóz: + maltóz: + L-arabinóz: + laktóz: + L-rhamnóz: + raffinóz: gyenge galaktit: -L-szorbóz: -D-mannit: + cellobióz: •f inozit: + trehalóz: + szalicin: gyenge melibióz: gyenge a-metil-D•glükozid: + melezitóz: ++ D-fruktóz: + glicerin: + D-mannóz: + Fenti tulajdonságok alapján a törzs a baktériumok Actinomycetes rendjének Streptomycetaceae családjában a Streptomyces genusba tartozik. A genuson belül a Streptomyces platensis Pittenger et Gottlieb 1954 fajnak felel meg [Waksman: The Actinomycetes Vol. 2. (1961)]. A fenti öt Streptomyces törzs által termelt glükóz-izomeráz enzimek annak ellenére, hogy maguk a törzsek mezofil (15 és 45 C° között nö-, vekvő) mikroorganizmusok, megfelelően jó hőtűrő képességgel rendelkeznek, azaz egy órás inkubációs idő alatt vizsgálva 80 C°-on mért aktivitásuk nagyobb, mint alacsonyabb hőmérsékleten. A találmány szerinti eljárásban használt mikroorganizmusok előnye, hogy a xilán hidrolízisét elvégzik, ilyen módon xilán-tartalmú táptalajon, pl. korpán növeszthetők. A találmány szerinti eljárásban felhasznált törzsek tenyésztésére a sugárgombák tenyésztésénél általánosan szokásos módszerek alkalmazhatók. A tenyésztést legelőnyösebben süllyesztett kultúrában végezhetjük. A tenyésztésre szolgáló táptalajban vízben oldott, illetve szuszpendált, a gomba által asszimilálni képes szén- és nitrogénforrások, szervetlen sók és egyéb járulékos alkatrészek (bioszanyagok, habzásgátlók stb.) lehetnek jelen. Szénforrásként maláta, glükóz, maltóz, szacharóz vagy egyéb cukrok, zsírok, zsírsavak, aminosavak és peptidek alkalmasak. Asszimilálható nitrogénforrásként mikrobiális, állati vagy növényi eredetű és/vagy anorganikus nitrogén-vegyületek, úgymint élesztőkivonat, pepton, húskivonat, hidrolizált kazein, szójaliszt, kukoricalekvár, ammóniumsók és nitrátok jöhetnek számításba. Gazdasági szempontokat is szem előtt tartva szénforrásként legelőnyösebb a hidrolizált keményítőt vagy glükózt, míg nitrogénforrásként a kukoricalekvárt tartalmazó táptalaj. Végül a jó növekedéshez és enzimtermeléshez szükségesek ásványi anyagok, ilyen a kálium, nátrium, kobalt,, foszfor és a kén. Előnyösek lehetnek még vitaminok és auxinok. Az enzim indukcióját vegytiszta xilózzal vagy xilánnal, xilán-tartalmú növényi részekkel, vagy 1 ezek savas vagy enzimes hidrolízisével kapott nyers f xilózzal végezhetjük. Az enzim induktora általában I olyan anyag, amelynek jelenléte az élő mikroorganizmus környezetében a megfelelő enzim szintézisére készteti a mikroorganizmust. A glükóz-izomeráz enzim induktora - a xilóz - lehet az egye-5