169999. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsav új acilszármazékainak előállítására

169999 10, szerek elegyeit alkalmazhatjuk. A fenti oldószereket vízzel vagy kis szénatomszámú alkánkarbonsavak kis szénatomszámú alkilésztereivél képezett elegyeik alakjában is alkalmazhatjuk (pl. etilacetát vagy butilacetát). 5 A kapott eluátumból szokásos módszerekkel izolálhatjuk a kívánt (I) általános képletű vegyületet (pl. bepárlás, pH-beállítás, liofilizálás és átkristályositás). A kapott (I) általános képletű új vegyületek az 10 alábbi jellemző tulajdonságokkal rendelkeznek: 1) Orális antimikróbás szerként alkalmazhatók és a Cephalexinnél hatásosabbak (a Cephalexin ismert orális antimikróbás szer). 2) Patogén mikroorganizmusokkal (különösen 15 Klebsiella pneumoniae és Proteus mirabilis törzsekkel) szemben erősebben hatnak, mint a Cephalexin. 3) Szérumszint, szöveteloszlás, epekiürülés és kísérleti egér fertőzéseknél mutatott védő hatás terén orális alkalmazással felülmúlják a Cephalexint. Az (I) általános képletű vegyületeknek a Cephalexinnél szemben mutatott többlethatását az alábbi összehasonlító farmakológiai tesztekkel igazoljuk: 1. teszt a) Teszt antibiotikum: 7-(3-mezilaminofenil-D-glicilamino)-3-metil-3-cefém-4-karbonsav és Cephalexin. b) Teszt-állat: SD-törzsből származó 180-230 g súlyú hím-patkányok. Az állatokat 24 órán át éheztettük. c) Teszt módszer (bio-meghatározás). 20 25 35 40 A teszt-antibiotikumok szérumszintjét, epében és szövetekben való szintjét a következő biológiai kísérlettel határozzuk meg. Teszt agar-lemezt készítünk oly módon, hogy 10 ml-enként 105

Bacillus subtilis ATCC 6633 spórát tartalmazó nátrium- 45 citrát-agart Petri-csészébe öntünk. 8 mm átmérőjű papÍT-lemezkéket standard oldatba vagy a teszt antibiotikum oldatába mártunk. Miután a fölös mennyiségű oldat a lemezkékről lecsurgott, ezeket az agar-lemez felületére helyezzük és 37 C -on 20 órán át inkubáljuk. Ezután a gátlási zóna átmérőjét megmérjük és az oldatban levő teszt-antibiotikum hatásos mennyiségét kiszámítjuk. 1) Szérum-szint meghatározása patkányon az antibiotikum orális adagolása után. 7-(3-mezilaminofenil-D-glicilamino)-3-metü-3-cefém-4-karbonsavat vagy Cephalexint 10 patkánynak 100 mg/kg egyszeri dózisban orálisan beadunk. Az adagolás után 1, 2, 4 és 6 órával vérmintákat veszünk. A teszt-antibiotikum koncentrációját a szérumban a fenti bio-kísérlettel meghatározzuk. Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: Átlagos szérum-szint Ong/mí) Teszt antibiotikum 1 óra 2 óra 4 óra 6 óra 7-(3-mezil aminofenil-D--glicil-amino)-3-metil-3--cefém-4-karbonsav 49,8 44,8 41,1 39,0 30 Cephalexin 23,1 12,3 6,6 3,9 2) Szöveteloszlás meghatározása patkányon a teszt-antibiotikum orális adagolása után: 7 -( 3-mezila minofenil-D-glicilamino)-3-metil-3-cefém-4-karbonsavat vagy Cephalexint 30-30 patkánynak 100mg/kg egyszeri dózisban orálisan beadunk. A beadás után 1, 2, és 4 órával minden állatcsoportban 10, patkányt elvéreztetünk. Az eltávolított májat, veséket, tüdőket, szívet és lépet kétszeres térfogatú 99%-os etanollal homogenizáljuk. A hornogenizátumot 10 percen át 10 000 G sebességgel centrifugáljuk. A teszt-antibiotikum koncentrációját a felül elhyelyezkedő folyadékban bio-kísérlettel meghatározzuk. Az eredményeket az alábbi táblázat tartalmazza: Idő Átlagos szövet-szint "(Mg/g) Teszt antibiotikum (óra) Máj Vese Tüdő Szív Lép 7-(3-mezilaminofenil-D-1 98,7 237 15,5 8,8 16,1 •glicilamino)-3-metil-2 76,0 223 12,0 6,8 17,1 -3-cefém-4-karbonsav 4 76,6 193 11,2 6,4 17,3 1 73,1 93,8 7,8 4,5 8,9 Cephalexin 2 47,5 50,7 2,5 0,8 3,4 4 33,8 33,8 0,7 0,5 0,5 3) Epekiürítés meghatározása az antibiotikum orális adagolása után patkányon. 60 10 patkányt éterrel érzéstelenítünk és az állatokba standard laboratóriumi módszerekkel polietilén csövet illesztünk. Ezután a patkányoknak 100 mg/kg egyszeri dózisban orálisan 7-(3-mezilaminofenil-D- 6

5 -glicinamino)-3-metil-3-cefém-4-karbonsavat vagy Cephalexint adunk. Az adagolástól számított 24 órán át a táblázatban megadott időközönként epe-mintát veszünk. A teszt-antibiotikum koncentrációját az epében az előzőekben ismertetett bio-kísérlettel meghatározzuk. Az eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze: 5