169959. lajstromszámú szabadalom • Tesztlap szervek normális vagy kóros működésének meghatározására
11 169959 I. táblázat folytatása 12 Érték határok Teszt alacsony normális magas Egységek Színhatárok 8 teszt-lap: Glükóz Összes protein Albumin 40-80 85-110 200-400 mg/100 ml 3-5 5-7 6-8 G/100 ml 2-4 3-5 4-6 G/100 ml világo szöld -sötétkék világoskék-sötétkék világoszöld-sötétzöld A kereskedelemben kapható 200 mm2 felületű, 15 0,03325-0,03587 cm vastagságú, 245-255 g/m2 súlyú cellulózpapírt használjuk.. A papír abszorpciója 0,1 ml vizet használva 9-20 sec, ez az érték megfelel a T 432 TAPPI tesztnek. A papír keresztirányú expanziója nedvesítés esetén 2,5%-nál ki- 20 sebb. Ezt a papírt 0,19 rész 2-(p-jódfenil)-3-(p-nitrofenil)-5-fenil-2H-tetrazólium-klorid (INT), 0,03 rész polioxietilén-(20)-cetiléter, (nedvesítőszer), és 100 ml vízben oldott 0,50 rész polimetakrilsav elegyéből készült oldattal telítjük, az oldat pH értéke 25 7,5. A fentiek szerint kezelt papírt vákuumban, szobahőmérsékleten (26 C ) megszárítjuk, sötét helyen tároljuk, majd 1,0 rész dilauril-tiodipropionát antioxidánst tartalmazó 100 rész hexán oldatába mártjuk. Ezt a papírt újra megszárítjuk és 100 rész 30 0,05M trisz-puffer, 2-amino-(hidroximetil)-l,3-propándiol, 0,09 rész diaforáz, 20,0 rész maltóz elegyéből készült 7,2 pH-jú oldatba mártjuk. A többször kezelt papírt újra megszárítjuk és egy olyan negyedik réteget viszünk fel rá, amely 100 rész 35 vízben 0,08 rész nikotinamid-adenin-dinukleotidot (NAD), 0,025 rész nedvesítőszert és 0,84 rész lítium-laktátot tartalmaz és a pH értéke 8,8. Ezek után a papírt újra megszárítjuk. 40 (2) Laktát-dehidrogenáz teszt és a hozzávaló nedvszívó hordozó A laktát-dihidrogenáz teszt hordozó anyagára vonatkozó részletek röviden ismertetve: a laktát-dehid- 45 rogenáz teszt nedvszívó hordozó anyagot (cellulóz alapú papír) tartalmaz, ehhez kovalens kötéssel kapcsolódik egy hidrofil, térhálós szulfitált aldehid, vagy keton polimer diszperzió, a diszperzió térhálójában foglal helyet az a száraz maradék, melyet úgy kapunk, 50 hogy az anyagot alkáli-laktát-só, nikotin-adenin-dinukleotid-foszfát és egy tetrazólium-só elegyével impregnáljuk. Ennek megvilágítására a következő példát ismertetjük. 55 A) Poliakrolein szolubizálása Keverővel, hűtővel, hőmérővel, nitrogéngáz bevezetésére alkalmas eszközzel és állandó hőmérséklet tartására alkalmas fürdővel ellátott reakcióedénybe 60 344 rész nátriummeta-biszulfitot és 2400 ml desztillált vizet adunk. Az oldat pH értékét 10 M-os nátriumhidroxid oldattal 5,6-ra állítjuk. Az oldathoz 300 rész finoman eloszlatott poliakroleint adunk. A reakciót nitrogén atmoszférában 65 C on 65 végezzük. A reakció végét tiszta, viszkózus, vízben oldható poliakrolein addukt keletkezése jelzi. A reakció végén a terméket lehűtjük és tároljuk. B) Az oldható poliakrolein térhálósítása Keverővel, nitrogén bevezetővel felszerelt üvegedénybe 2500 ml, fentiek szerint készített poliakrolein-biszulfit-adduktot és 4000 ml desztillált vizet adunk. Az oldatot lassan keverjük és négy óránál hosszabb idő alatt 400 ml desztillált vízben oldott 300 rész 1,6-hexametilén-diamint csepegtetünk hozzá. Sárga, térhálós polimer szuszpenzió keletkezik, melyet nitrogén atmoszférában 10 percig 60 C -on felmelegítünk, majd az elegyet szobahőmérsékletre hűtjük. A polimert Büchner tölcsérbe helyezett szűrővásznon keresztül szűrjük, és vízzel alaposan mossuk. A térhálós polimert ezek után 15-20 perc alatt tízszeres térfogatú vízben szuszpendáljuk, majd az elegyet 20 percig állni hagyjuk és leszűrjük. A mosási műveletet mindaddig folytatjuk, míg a mosóoldat pH-ja 6,5-7 közötti értéket nem mutat. A szilárd adduktot ezután újabb 20 percen keresztül feliszapoljuk, és 1,0 Mos dinátriumfoszfáttal a pH értéket 6,5-re állítjuk, majd a kapott szuszpenziót desztillált vízzel mossuk. C) Kötött diaforázt tartalmazó papír előállítása 0,1 rész diaforázt és 80 ml foszfát-puffért (0,1 M, pH 7,2) elegyítünk. Az oldatot keverés nélkül 30 percen keresztül hűtőszekrényben állni hagyjuk. Ezután az enzim keverés hatására teljesen feloldódik. Egy másik edényben 2,0 rész, a fentiek szerint elkészített modifikált poliakroleint és 50 ml fent említett foszfát-puffer elegyét szuszpendáljuk. 10 perces keverés után a pH értéket 0,1 M-os nátriumhidroxid segítségével újra 7,2-re állítjuk. Ezek után a két edény tartalmát összekeverjük, és lassú keverés közben egy éjszakán keresztül 40 C -on tartjuk. Az enzim-adduktot leszűrjük, és bőséges mennyiségű iónmentesített vízzel mossuk. Ily módon 75-79%-ban állandó kötés létesül. 50/50 Albacel/Astracel pépet (koncentráció: 2,6 g/100 ml) vízzel, majd metanollal mosunk, ily módon a maradék szulfit szennyezést eltávolítjuk, majd a kapott anyagot megszárítjuk. A 10 rész keletkezett péphez 2,0 rész nedves enzim-adduktot keverünk. Az elegyet 5 percig keverjük, és közben 6
