169959. lajstromszámú szabadalom • Tesztlap szervek normális vagy kóros működésének meghatározására

13 169959 14 jéggel hűtjük. A kapott iszapot durvaszálú papír-szövetre visszük, melynek vastagsága megfelel a szabványos szűrőpapír vastagságának, átmérője 152,4 mm. A bevont szövetet az úgynevezett angol kézi lemez-saWonra visszük. A papírt vákuumban 5 nedvszívó anyag felett 16 óra hosszat szárítjuk. Ezután a keletkezett lemezt levesszük. A fentiek szerint előállított papírt 100 rész olyan vizes oldattal telítjük, amely 0,7 rész polimetakrilsavat, 1,0 rész trisz-puffert, például 10 2-amino-2-(hidroximetil)-l,3-propándiolt, 20 rész d (+) maltózt, 0,025 rész polioxietilén (20)-cetilétert, 0,08 rész nikotinamid-adenin-dinukleotidot (NAD), 0,16 rész [2-(p-jódfenil)-3-(p-nitrofenil)-5-fenil-2H-tetrazóliumkloridot] (INT), 0,5 rész p-dimetil-ami- 15 nonitrozobenzolt és 1,5 rész 60%-os lítiumlaktát oldatot tartalmaz. Az egész folyamat alatt az elegy pH értéke 8,6. A nedves papírt ezután szobahőmérsékleten sötétben, vákuumban megszárítjuk. 20 (3) Kreatin-foszfokináz-teszt és a hozzá használható nedvszívó hordozó anyag Ehhez a teszthez egy három réteges nedvszívó hordozó szükséges. 25 Első réteg A legfelső réteget úgy készítjük el, hogy Metricel GA membrán-szűrőt mártunk egy olyan oldatba, mely 2 ml 0,1 M trisz-pufferben 120 mg 30 kreatinin-foszfátot, (CP), és 18,5 mg adenin difoszfátot (ADP) tartalmaz, a puffer pH-ja 7,5. Ezután a membrán-szűrőt vákuumban szárítjuk. A szárítást sötétben, szobahőmérsékleten végezzük. 35 Második réteg Ez a középső réteg úgy készül, hogy Whatman 42. számú szűrőpapírt mártunk 0,1 mólos 7,5 pH-jú trisz-puffer-oldatba, amely 10~2 mól magnéziumkloridot. 54 mg glükózt, 45 mg trifoszforidin-nuk- 40 leotidot, 2 g d-maltózt, 1,5 ml hexokináz szuszpenziót (HK) és 1,5 ml glükóz-ó-foszfát-dehidrogenázt tartalmaz. A felesleges oldatot eltávolítjuk és a papírt az első rétegnél leírtak szerint vákuumban megszárítjuk. 45 Harmadik réteg Ez a legalsó réteg úgy készül, hogy egy 7,6 mm vastag filmet öntünk 5,0 súly% metilcellulózt, 0,2 súly% 2-(p-jódfenil)-3-(-nitrofenil)-5-fenil-2H-tet- 50 razólium-kloridot (INT) és 0,005 súly% fenazin-metoszulfátot (PMS) tartalmazó 4pH-jú oldatból. A vízoldható filmet teljes sötétségben üveg-felületre " öntjük. Az összetett CPK papír úgy készül, hogy három 55 egyforma átmérőjű kört vágunk a fentebb említett rétegekből és közvetlenül egymás fölé rakjuk őket, a harmadik réteggel az alján, a második .réteggel a közepén és az első réteggel a tetején. 60 (4) Glutaminsav-oxálecetsav-transzamináz szérum teszt és a hozzá használatos nedvszívó anyag A jelen példa szerinti glutaminsav-oxaloecetsav-transzamináz szérum teszthez két nedvszívó anyag, 65 célszerűen cellulóz papír, szükséges. A papírra impregnálással felvisszük a szükséges reagens-anyagokat. Az egyik papír L-aszparaginsavat és a-ketoglutársavat tartalmaz, a másik papír a diazónium-sóval végzett impregnálás száraz maradékát tartalmazza. Mindezt az alábbi példával mutatjuk be: A) Savanyú nedvszívó réteg előállítása Whatman 3. számú papírcsíkot 0,01 n sósavoldattal mosunk, desztillált vízzel öblítjük és levegőn megszárítjuk. Az így kapott papírt ezután 0,15 mól-os 9 pH-jú foszfát-puffer-oldatba mártjuk. A puffer-oldat 0,05 mól aszparaginsavat, 0,01 mól a-ketoglutársavat és 0,1% kereskedelemben kapható polioxietilén-lauril-étert (nedvesítőszer) tartalmaz. Miután 5 percen keresztül a papírt ebben az oldatban állni hagyjuk, kivesszük. A felesleges folyadékot eltávolítjuk és a papírt hideg, áramló levegővel szárítjuk. B) A diazónium nedvszívó réteg elkészítése A fentiek szerint előmosott Whatman 3. számú papírt bemártjuk egy 0,3% diazónium-sót, 2-metoxi-4-benzamido-5-metil-diazónium-hidrokloridot, 0,1% fent említett nedvesít őszért és 3,0% oldható keményítőt tartalmazó vizes oldatba. A keményítőt a vízhez adva a keletkezett szuszpenziót felforraljuk, majd lehűtjük, és ehhez adjuk a diazónium-komponenst. Az oldat végleges pH-ját híg sósav oldattal 4— 4,5-re állítjuk. Miután a csík néhány percig állt ebben az oldatban, kiemeljük. A felesleges folyadékot leszívatjuk, és a csíkot vákuumban, sötétben megszárítjuk. C) A csíkok összeragasztása A fent említett savas csíkot (A) 5 mm vastag cellulóz-acetát filmmel vonjuk be. A filmbevonathoz 10% cellulóz-acetátot tartalmazó etilacetát --oldatot használunk. Az oldat 0,1%. fent említett nedvesít őszért tartalmaz. A csíkot a levegőn megszárítjuk, majd egy második bevonatot készítünk ugyanabból a ragasztó-anyagból, és még nedves állapotban rápréseljük a diazónium csíkra (B), melyet a fentiek szerint készítettünk el. A csíkokat két sima fémlemez közé tesszük, és enyhe nyomással 15 percig összepréseljük. A keletkezett ragasztott csíkokat a lemezek közül kivesszük, és áramló levegő hatásának tesszük ki (sötétben), ily módon a ragasztó-anyag oldószerének utolsó maradékát is eltávolítjuk. A szív működését mutató teszt-lap előállítása és használata Minden egyes, a fentiek szerint készített reagenssel impregnált papírból kivágunk egy közel 13 mm átmérőjű lapot. Minden folt-teszt számára egy lapot, összesen négyet készítünk. Mindegyik lap tartalmazza az összes, az (1), (2), (3) és (4) tesztekhez szükséges reagenseket. A kivágott lapokat megfelelő ragasztóanyaggal felerősítjük egy teszt-lapra. Az egyes teszt-foltok között a szín-7