169942. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino-3-htt metilcef-3-ém-4-karbonsavak mikrobiológiai előállítására

7 169942 8 jelent, gyengén bázisos heterociklusos tercier aminnal, például piridinnel végzett reakcióval (38—26179 számú japán szabadalmi leírás) vagy más módszerekkel (39-17 926, 41-4 714, 43-5 010, 42-1305, 46-14 735, 46-13 025, 46-15 951 és 40-9 155 számú japán szabadalmi leírások) állítjuk elő. A II általános képletű vegyület vízben oldható sója, például nátrium-, kálium vagy ammóniumsója alakjában is használható. A reakciókeverék alikvot részének pH-ját n sósavval 2,5-re állítjuk be, majd az oldatot fele mennyiségű butilacetáttal háromszor mossuk, pH-ját n nátriumhidroxid-oldattal 7,5-re beállítjuk. Az oldat további alikvot részét fenilacetilkloriddal reagáltatjuk, és Bacillus subtilis PCI 211-gyei 37 -on 16 óra hosszat inkubálva meghatározzuk. 10 Az így kapott I általános képletű vegyületet ismert módszerekkel, például oszlopkromatográfiával, ioncserével, lecsapással stb. különíthetjük el és tisztíthatjuk. 15 Az 1 388 267 számú brit szabadalmi leírás szerint az I általános képletű vegyületek előállítására a II általános képletű vegyületeket más, kémiai módszerrel vízmentes körülmények között karboxil-védőcsoport alkalmazásával dezacilezik. 20 A kiindulási vegyület előállítása viszont D-aminosav-oxidázzal vizes közegben történik (1 272 769 számú brit szabadalmi leírás), tehát a dezacilezés előtt teljes elkülönítés szükséges, és a védőcsoportok használata két további lépést igényel. Ezzel 25 szemben a találmány szerint a kiindulási vegyületek közvetlenül, elkülönítés és vízmentesítés nélkül dezacilezhetők, és védőcsoportra sincs szükség. A következő példák a találmányt közelebbről 30 szemléltetik, de hatályát semmiképpen sem korlátozzák. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. Az I általános képletű aminovegyület mégha- 35 tarozása: 40 45 Véko nyrét eg-kro matogr áf ia Vivőanyag: előzetesen bevont kovasavgél Kifejlesztőszer I: 3:1:1 arányú n-butanol-ecetsav-víz elegy, 50 II: 15:3:10:12 arányú n-butanol-ecetsav-piridin-víz elegy, III: 3:1:5:1 arányú n-butanol-ecetsav-formaldehid-víz elegy. 55 1-4. példák 0,5% húskivonatot, 1% peptont, 0,1% élesztőkivonatot, 0,05% glutársavat és 0,5% nátriumklori- 60 dot tartalmazó 100 ml folyékony táptalajt 500 ml"es Erlenmeyer-lombikba töltünk, 45 percig 120 -on sterilizáljuk, majd Comamonas sp. SY-77-1 FERM-P2410 törzzsel beoltjuk, és forgó rázógépen 8 napig 30 -on inkubáljuk. A 65 tenyésztés befejezése után a kapott fermentlevet hűtés közben percenként 12000 fordulattal 10 percig centrifugálva elkülönítjük a baktériumtömeget. Ezt a tömeget 50 ml 0,1 mólos, 7,0 pH-jú foszfátpufferoldatban szuszpendáljuk, hozzáadunk még 50 ml 7,0 pH-jú 0,1 mólos foszfátpufferoldatot - mindkét, részlet 3% 3-acetoximetil-7-(4-karboxi-butilamino)-cef-3-ém-4-karbonsavat tartalmaz — és 10 óra hosszat 37 -on inkubáljuk, mire I általános képletű aminovegyületet kapunk. A baktériumok tenyésztését hasonló módon megismételjük, és a tenyészettel mindegyik alább felsorolt vegyületet inkubáljuk: 3-hidroximetil-7-(4-karboxi-butilamino)-cef-3-ém-4-karbonsav, 3-(l-piridil-metil)-7-(4-karboxi-butilamino)-cef-3-ém-4-karbonsav és 3-[(5-metil-l,3,4-tiadiazol-2-il)-tiometil]--7-(4-karboxi-butilamino)-cef-3-ém-4-kar bonsav. Az eredményeket lásd az 1. táblázatban. Az aminovegyületeket vékonyréteg-kromatográfia és ninhidrines előhívás, valamint ultraibolya spektrum és biológiai meghatározás segítségével azonosítjuk. 1. táblázat II általános képletű aminovegyület (R= -COOH) Példa X Kitermelés % Vékonyrétegkromatográfiai Rf oldatrendszer 1. -OCOCH3 53 0,15 I 2. -OH 64 0,33 II 3'. 1-piridil 58 0,23 III 4. 5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-il 50 0,17 I 5-7. példák Az 1-4. példákban használt 3-acetoximetil-7-(4--karboxibutilamino)-cef-3-ém-4-karbonsavat és a többi vegyületeket az alább felsorolt vegyületekkel helyettesítve a 2. táblázatban közölt eredményeket kapjuk: 3-acetoximetil-7-(5-karboxi-5-oxopentilamino)-cef-3-ém-4-karbonsav 3-hidroximetil-7-(5-karboxi-5-oxopentilamino)-cef-3-ém-4-karbonsav és 3-(l-piridil-metil)-7-(5-karboxi-5-' -oxo pentilamino)-cef- 3-ém-4-karbo nsav. 4