169942. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino-3-htt metilcef-3-ém-4-karbonsavak mikrobiológiai előállítására

169942 10 2. táblázat II általános képletű aminovegyület (R= -COCOOH) KiterVékonyrétegPélda X melés kromatográfiai % Rf

oldatrendszer 6. -OCOCH3 -OH 7. 1-piridil 8. példa 50 58 52 0,15 0,34 0,23 II III A Comamonas sp. SY-77-1 FERM-P 2410 törzs 4. példa szerinti tenyészetésével 6 liter fermentlevet kapunk. A sejteket percenként 12000 fordulattal 10 percig centrifugáljuk, és az elkülönített sejteket mossuk. Az így kapott sejttömeget 0,1 mólos 7,0 pH-jú foszfátpuffer-oldatban szuszpendáljuk, a kapott 300 ml szuszpenzióhoz 15 ml kationos felületaktív szert adunk, szobahőmérsékleten 30 percig keverjük, majd percenként 10000 fordulattal 10 percig centrifugáljuk, mire 288 ml felülűszó folyadékot kapunk. A felülúszó folyadékot cellofáncsőben 0,1 mólos, 7,0 pH-jú foszfát puff er-oldattal szemben 4 -on, 48 óra hosszat dializáljuk. 300 ml N-dezacilező hatású dializátumot kapunk. Az így kapott dializátum szintén a találmány szerinti mikroorganizmus-tenyészet előállítására szolgál, és mikrokapszula-ké szítmennyé vagy szárítva, liofilizálva és ammóniumszulfáttal lecsapva por alakú készítménnyé készíthető ki. 9. példa 3g cellulózacetátot (triacetát alakban) 100 ml metilénkloridban oldunk. Az 1. példa szerint Comamonas sp. SY-77-1 FERM-P 2410 törzs tenyésztésével kapott 3 g sejtet desztillált vízben szuszpendálunk, és diszpergálunk. Az így kapott emulziót szóbahőmérsékleten 800 ml 2%-os vizes zselatinoldatban diszpergáljuk, és a metilénklorid teljes elpárolgásáig keverve Comamonas sp. SY-77-1 FERM-P 2410-t tartalmazó, 0,1—0,3 mm átmérőjű mikrokapszulákat készítünk. Ezeket a mikrokapszulákat az alábbi példák szerint I általános képletű a minő vegyületek előállítására használhatjuk. 10 15 20 25 30 35 40 10. példa A 9. példa szerint eljárva, de 20 ml vízben szuszpendált 3 g Comamonas sejtek helyett a 14. példa szerint előállított, N-dezacilező hatású-20 ml felülúszó folyadékot használva, ugyanolyan méretű mikrokapszulákat kapunk, mint a 15. példában. 11. példa A 9. példa szerint előállított 21,9 g (nedves súly) mikrokapszulát 2 cm átmérőjű, 9,6 cm hosszú, 30 ml térfogatú, köpennyel ellátott oszlopba töltjük, és 7,0 pH-jú 0,1 mólos foszfátpuffer-oldattal mossuk. 0,4 fajlagos térfogatnál az oszlopba töltünk 0,1 mólos foszfátpuffer-oldattal készült 840 ml, 9,92 mg/ml koncentrációjú 3-acetoximetil-7-(4-karboxi-butilamino)-3-cef-4-ém-karbonsav-oldatot. 865 ml 7-aminocefalosporánsavat tartalmazó eluátumot kapunk (az átalakulás 84,5%-os), ezt 80 ml-re bepároljuk, és pH-ját 3,2-re állítjuk be. A bepárolt 80 ml oldatot éjjelen át 4 -on állni hagyjuk, mire a 7-aminocefalosporánsav kicsapódik. Kitermelés: 4,6 g. Tisztasága 86,2%-os. 12. példa A 11. példa szerint eljárva, de a Comamonas sp. SY-77-1 FERM-P 2410 baktériumokat tartalmazó mikrokapszulák helyett a 10. példa szerint kapott N-dezacilező hatású felülúszó folyadékot tartalmazó mikrokapszulákat és a használt vegyület helyett 3-acetoximetil-7-(4-karboxi-butilamino)-3--cefém-4-karbonsav, 3-metil-7-(5-karboxi-5-oxo-pentilamino)-3-cefém-4-karbonsav és 3-hidroximetil-7--(5-karboxi-5-oxo-pentilamino)-3-cefém-4-karbonsav 1%-os oldatát használva,' a megfelelő I általános képletű vegyületeket kapjuk 87,5%, 78,8%, illetve 79,5% kitermeléssel. 45 50 55 Szabadalmi igénypont: Eljárás az I általános képletű 7-arnino-3-metil-cef-3-ém-4-karbonsavak - ebben a képletben X hidroxil- vagy acetoxicsoportot vagy egy nukleofil csoportot, előnyösen piridil- vagy (5-metil-l,3,4-tiadiazol-2-il)-tio-csoportot jelent — előállítására mikrobiológiai úton, azzal jellemezve, hogy egy II általános képletű vegyületet — ebben a képletben X a fenti jelentésű, és R-COOH vagy -COCOOH képletű csoportot jelent - a Comamonas sp. SY-77-1 FERM-P 2410 mikroorganizmus folyékony táptalajban való aerób tenyésztésével kapott tenyészettel vagy egy abból ismert módon előállított N-dezacilező enzim-készítménnyel reagáltatunk, majd a kapott terméket ismert módon elkülönítjük és tisztítjuk. 1 lap rajz-A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 774215 - Zrínyi Nyomda 5