169758. lajstromszámú szabadalom • Eljárás élő szarvasmarha adeno-vírustörzs és az élő vírust tartalmazó vakcina előállítására
11 169758 \1 Amint, az 5. táblázat adataiból kitűnik, a vakcinával kezelt állatok orrából újból elkülönített vírus hőmérsékletérzékeny jellege fennmarad, és azonos a vakcinában jelenlevő Eunice törzs hőmérsékletérzékeny jellegével. Az Eunice vírustörzs tehát in vivo körülmények között is megtartja hőmérsékletérzékeny jellegét. d) A vírus újbóli elkülönítése fertőzés után Az állatokat vakcinával kezeljük, majd 27 nappal a kezelés után az állatokat WBR 1/7 törzzsel fertőzzük meg. Az állatok mindkét orrüregébe 107 TCID 50 egység fertőző vírust juttatunk. A vakcinával kezelt állatok orrából újból elkülönített vírust kémcsövekben szekunder embrionális szarvasmarha veseszöveten 14 napon át 39,5 C°-on inkubáljuk. A negatív mintákat ugyanezen a táptalajon ugyanilyen körülmények között további tenyésztési lépésnek vetjük alá. Az eredményeket a 6. táblázatban közöljük. 6. táblázat Állat száma Állat állapota 3. Mintavétel a a fertőzés utáni Állat száma Állat állapota 3. 4. 1 6. | 7. 1 10. Állat állapota 3. napon 70 72 71 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 közvetett kontroll közvetett kontroll közvetlen kontroll közvetlen kontroll vakcinával kezelt vakcinával kezelt vakcinával kezelt vakcinával kezelt vakcinával kezelt vakcinával kezelt vakcinával kezelt vakcinával kezelt vakcinával kezelt + +• + + + + + + — + + 10 15 20 25 — 30 35 — 40 (+ ) = ismételt tenyésztés után poztív A 6. táblázat adatai azt jelzik, hogy a fertőző vírus 45 a vakcinával kezelt 9 állat közül csak két egyed orrából, és csak a fertőzés utáni harmadik napon különíthető el. Ezzel ellentétben a fertőző vírus valamennyi kontroli-állat orrából elkülöníthető. A közvetett kontroli-állatok (70 és 72 sz. állat) esetén a megfertőzést kö- 50 vető összesen 10 napos megfigyelési időszak alatt vett 5 mintából 3 pozitívnak bizonyult. Az 5. táblázat adatai azt is igazolják, hogy a fertőző vírus a vakcinával kezelt állatok orrüregében nem szaporodik. 55 ej Szérum-vizsgálat vakcinás kezelés után A szérum-semlegesítési kísérletet a konstans vírus/ 60 szérum hígítási módszerrel végezzük. 100 TCID50 egységet tartalmazó szérumból indulunk ki; az első hígítás V4 -es. A szérumokat előzetesen 56 C°-on végzett 30 perces hőkezeléssel inaktiváljuk, és minden egyes szérum-hígí- 65 tást 1 órán át 35 G?-on érintkezésbe hozunk a vírussal. Ezután a szérum-mintát 0,2 ml-es részletekben kémcsövekbe osztjuk szét; minden egyes szérum-hígításhoz 4 kémcsövet használunk fel. A kémcsövekbe táptalajt töltünk, a kémcsövek tartalmát 35 C°-on inkubáljuk, majd 14 nap elteltével meghatározzuk a szérum-minták vírus-faktorát. A szérum-semlegesítési kísérlet eredményeit a 7. táblázatban közöljük. A megadott számadatok azon maximális hígítások reciprokai, ahol a kémcsövek 50%-ánál a vírus semlegesítése még teljes mértékű. 7. táblázat Vírus-faktor mintavétel a kezelés utáni —1. 27.» 42." 70 közvetett kontroll 72 közvetett kontroll 71 közvetlen kontroll 73 közvetlen kontroll 74 vakcinával kezelt 75 vakcinával kezelt 76 vakcinával kezelt 77 vakcinával kezelt 78 vakcinával kezelt 79 vakcinával kezelt 80 vakcinával kezelt 81 vakcinával kezelt 82 vakcinával kezelt = a fertőzés napja ; 15 nappal a megfertőzés után 4 <8 <4 64 64 64 128 128 ^256 ^128 128 128 32 S256 512 128 S256 S1024 32 0:256 512 0:128 S256 256 32 &256 256 32 S256 S1024 16 S 256 512 ^128 s:256 256 8 128 128 16 256 512 1024 512 S2048 1024 256 256 2048 512 2048 128 Az eredmények azt igazolják, hogy az állatok, amelyeknek antitest-faktora a vakcinás kezelés idején 128 vagy annál kisebb érték volt, 13 nap elteltével már reagáltak a vakcinás kezelésre. Ezzel szemben a közvetlen és közvetett kontroli-állatoknál (a 71 sz. állat kivételével) a megfigyelési időszak alatt nem észleltünk jelentős antitest-faktor növekedést. A fertőzés után észlelt eredményekből megállapítható, hogy valamennyi kontroll állat antitest-faktora — a 71 sz. állat kivételével — nagymértékben növekedik, míg a vakcinával kezelt állatok esetén — a 81 sz. állat kivételével — nem tapasztaltunk jelentős antitestfaktornövekedést. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy a találmány szerinti vakcina igen nagymértékű antigén hatást fejt ki. f) Az orrváladék szerológiai jellemzői Az orrváladék semlegesítőképességéí a konstans orrváladék dózis/vírus hígítási módszerrel vizsgáljuk. Az orrváladék-mintát a következőképpen különítjük el: az állatok orrüregét orrüregenként 50 ml normál sóoldattal mossuk, a kapott mosófolyadékokat ultrahanggal besugározzuk, majd ultraszűréssel kezdeti térfogatuk 1/10-ére töményítjük. Az orrváladék semlegesítőképességére jellemző adatokat a 8. táblázatban közöljük. Az adatok 0,1 ml betöményített minta semlegesítési indexei. 6
