169758. lajstromszámú szabadalom • Eljárás élő szarvasmarha adeno-vírustörzs és az élő vírust tartalmazó vakcina előállítására
13 169758 14 8. táblázat Állat állapota Semlegesítési index (mintavétel a kezelés utáni Állat száma Állat állapota —1. 11. 17. 27. Állat állapota napon) 70 közvetett kontroll 1 0 1 1 72 közvetett kontroll 0 0 nv nv 71 közvetlen kontroll 3 0 0 0 73 közvetlen kontroll 0 0 0 0 74 vakcinával kezelt 0 3 3 3 75 vakcinával kezelt 1 >4 >4 =>4 76 vakcinával kezelt 0 2 nv 2 77 vakcinával kezelt 0 3 3 0 78 vakcinával kezelt 0 1 1 2 79 vakcinával kezelt 0 3 3 1 80 vakcinával kezelt 0 3 1 2 81 vakcinával kezelt 0 3 nv 3 82.. vakcinával kezelt 0 1 1 0 nv = nem vizsgáltuk A 8. táblázat adatai azt igazolják, hogy a találmány szerinti vakcinával végzett kezelés után 11 nappal 9 állat közül 6-nál jelentős (3-as vagy nagyobb semlegesítési indexnek megfelelő) antitest-szint észlelhető, míg a fennmaradó, vakcinával kezelt 3 állat antitest-szintje l-es vagy 2-es semlegesítési indexnek felel meg. Az antitest-szint — a 77 és 82 sz. állatot kivéve — a teljes 27 napos megfigyelési idő során változatlan marad. A 71 és 73 sz. közvetlen kontroli-állatok esetén helyi antitest-képződést nem észleltünk. A vakcinás kezelés előtt 3 állat orrváladékában észleltünk antitesteket; ezen állatok közül egyet kezeltünk vakcinával. 11 nappal a vakcinás kezelés után csak a vakcinával kezelt állatnál (75 sz. állat) észleltünk jelentős semlegesítési index-növekedést. A 8. táblázatban felsorolt adatok a 6. táblázat adataival összevetve azt igazolják, hogy a találmány szerint előállított vakcina értékes immunogén hatással rendelkezik. g) A vakcinás kezeléssel indukált helyi antitestek specifikusságának vizsgálata A vakcinás kezeléssel indukált helyi antitestek specifikusságának vizsgálata során a vakcinás kezelés utáni 11., 17. és 27. napon az állatok orrváladékából mintát veszünk, a mintákat egyesítjük és betöményítjük. Az így kapott minták semlegesítőképességét szarvasmarha Adeno 1 vírussal és szarvasmarha Adeno 3 vírussal szemben vizsgáljuk. Az eredményeket a 9. táblázatban közöljük. 9. táblázat Állat állapota Semlegesítési index Állat száma Állat állapota Szarvasmarha Adeno 3 vírussal szemben Szarvasmarha Adeno 1 vírussal szemben 71 közvetlen kontroll 0 0 73 közvetlen kontroll 0 0 9. táblázat folytatása Állat állapota Semlegesítési index Állat száma Állat állapota Szarvasmarha Adeno 3 vírussá! szemben Szarvasmarha Adeno 1 vírussal szemben 74 vakcinával kezelt 2 0 75 vakcinával kezelt >4 0 77 vakcinával kezelt 3 0 79 vakcinával kezelt 3 0 80 ' vakcinával kezelt 2 0 81 vakcinával kezelt 3 0 82 vakcinával kezelt 1 0 Amint a 9. táblázat adataiból kitűnik, az orrváladékban kialakuló antitestek a szarvasmarha Adeno 3 vírusra specifikusak, és szarvasmarha Adeno 1 vírussal nem adnak kereszt-reakciót. 20 h) Tünetek vizsgálata A vakcinás kezelés után az állatokon naponta a következő vizsgálatokat hajtjuk végre: 25 — hőmérsékletmérés, — az esetleges szem-, légzőszervi és emésztőrendszeri tünetek klinikai vizsgálata. Az állatok állapota minden esetben normális volt. Az a tény, hogy a vakcinában levő törzs tényleges elsza-30 porodásának ellenére sem lépnek fel klinikailag kóros tünetek, azt jelzi, hogy a találmány szerint előállított vakcina ártalmatlan. 3. példa 35 A 2. példában leírt eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy a stabilizáló oldattal hígított felső folyadékfázishoz a szarvasmarha parainfluenza 3 (PI3) vírus hőmérsékletre érzékeny mutánsát (RLB 103 vírus-40 törzset, lásd N. Zygraich, M. Lobman és C. Huygelen, J. Hgy. Camb. 70, 229—34 [1972]) és fertőző szarvasmarha rhinotracheitis-vírus (IBR) hőmérsékletre érzékeny mutánsát (RLB 106 vírustörzset; NRRL 5671) adunk, és ezt a keveréket osztjuk szét az üvegfiolákba. 45 Minden egyes üvegfiola 106,5 TCID 50 egység Eunice szarvasmarha Adeno 3 vírustörzset, 107> 2 TCID 50 egység szarvasmarha PI3 vírustörzset és 10 6,8 TCID 50 egység IBR vírustörzset vagy a felsorolt mennyiségek többszörösét tartalmazza. A fiolák tartalmát fagyasztva szá-50 rítjuk, majd a fiolákat lezárjuk. Egy vagy több dózist tartalmazó készítményeket kapunk. Használat előtt a szárazampullás készítményekhez dózisonként 4—5 ml vizet adunk, majd a kapott vakcinát orr-permet formájában, intranazálisan adjuk be az állatoknak. 55 Klinikai vizsgálatok A klinikai vizsgálatokat 4 db, 3—6 hónapos, „Friesian dairy cattle" fajú borjún végezzük. 60 Az állatok orrüregébe dózisegységnyi mennyiségű fenti háromkomponensű vakcinát juttatunk. A vakcinás kezelés előtt és 6 héttel a vakcinás kezelés után az állatokból vérmintát veszünk, és a mintákat szerológiai vizsgálatoknak vetjük alá. Az eredményeket a 10. táblá-65 zatban közöljük. 7
