169752. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív pankreász-por előállítására

3 169752 4 A pankreászból előállított készítményeket általában Pankreatin (pancreatinum) néven a humán gyógyászatban emésztési elégtelenségek megszüntetésére szolgáló gyógyszerek hatóanyagaként alkalmazzák. Pankreatin előállítására jelenleg igen sok eljárás ismeretes. Ezek mindegyike a következő technológiai lépéseket tartalmazza: a szerv péppé őrlése, esetleg a homogenizátum hígítása, a rostos szövetrészek eltávolítása, zsírmentesítés, ezzel egyidejűleg az aktív fehérjefrakció dúsítása, majd kíméletes szárítása (általában 60 C°nál alacsonyabb hőmérsékleten). A 2 503 313 számú USA-beli szabadalmi leírás szerint a szerv zsírmentesítése és szárítása vízzel nem elegyedő, de azzal azeotropot képező zsíroldószer azeotrop desztillálásával végezhető. A további eljárások egy része az enzimatikusan aktív fehérjefrakció kisózással (3 168 448 számú USA-beli szabadalmi leírás) vagy pH-változtatással (3 260 654 számú USA-beli szabadalmi leírás) történő dúsítását alkalmazza, az ismert technológiák legnagyobb részében pedig a zsírtalanítási, vízmentesítési és fehérjék icsapási lépést egy fázisban, acetonos kezeléssel végzik (3 223 594 számú USA-beli, 928 654 számú brit és 2 106 706 számú NSZK-beli szabadalmi leírás). A fibrinanyagok eltávolítása villaszerűén kiképzett keverők segítségével történhet. A zimogén formában levő enzimek aktiválására alkalmazott eljárások a következők: autolízis ellenőrzött hőmérsékleten, tripszin- vagy duodenum-homogenizátum hozzáadás. Az eljárások mindegyikében a termék végső szárítását 40—60 C°-on, csökkentett nyomáson végzik. Ismeretes továbbá, hogy az Ullmann-féle Enzyklopädie der Technischen Chemie 7. kötet 3920. oldalán (1956) a vákuumban történő szárítás mellett meleg levegőáramban, maximálisan 40 e'en történő szárítást írnak le, mint lehetséges szárítási módot. A porlasztva szárítási technológia azonban alapvetően különbözik ezektől a hagyományos eljárásoktól több tényezőben, mint pl. a szárítandó anyag és a forró levegő találkozásának időtartama, a szárítótorony térbeli hőmérsékleti eloszlása, a szárítandó anyag részecskenagysága stb. Ezek a jellemzők együttesen biztosítják azt, hogy az érzékeny anyag szárítása a teljes időintervallumban kíméletesen, alacsony hőmérsékleten történjék. Ha a szerv gyűjtését nem megfelelő körülmények között végzik, illetve bélhomogenizátummal végzett aktiválás esetén a termék tartós sterilezési eljárást (3 óra, 82 C°) igényel. A 2 106 706 számú NSZK-beli szabadalmi leírás tanúsága szerint kritikus hőmérsékleti intervallumokban az enzimfehérjék hőstabilitását és egyúttal aktivitásuk mértékét is növelni lehet Ca2+ -ionok kalciumszulfát vagy kalciumacetát alakjában való hozzáadásával. A 140 805 és 147 324 számú magyar szabadalmi leírások az inzulingyártási technológia során visszamaradt szövetrészekből, alacsony etil- vagy metilalkohol koncentrációjú vizesközegbőlsavhozzáadásával kicsapott (magas proteolitikus aktivitású) fehérjefrakciók fagyasztva szárítását javasolják. A termékek enzimaktivitási értékeit nemzetközi viszonylatban az amerikai gyógyszerkönyv (NF, National Formulary XIII, Am. Pharm. Ass., Washington, D. C, 1970.) előírásai szerint minősítik. A fenti eljárások eredményeként nagy tisztaságú, de drága és csak korlátozott mennyiségben előállítható terméket kapnak, amely a humán gyógyászat és a biokékémiai készítményeket értékesítő cégek számára is nehezen hozzáférhető. A találmány célja olyan eljárás kidolgozása, amellyel a vágóhidakon keletkező nagy mennyiségű állati szervből nagy mennyiségben nyerhető olcsó és jól tárolható, biológiailag aktív pankreász-por, amely humán gyógyá-5 szati félkésztermékként és állati takarmánykiegészítőként alkalmazható. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy az adott esetben fagyasztott, előnyösen péppé őrölt, duodenummal és/vagy vékonybél homogenizátummal és/vagy azok 10 nyálkahártya-homogenizátumával összekevert pankreászt a rostos részek eltávolítása, adott esetben valamely aktiválószer és/vagy tartósítószer hozzáadása, a keverék homogenizálása és alacsonyabb hőmérsékleten történő állni hagyása után porlasztó-szárítóban szárítjuk oly 15 módon, hogy a szárítás során az anyag hőmérséklete 40 és 90 C° közötti, előnyösen 55 és 65 C° közötti legyen. Aktiválószerként bármely ismert aktiválószert alkalmazhatunk. Kísérleteink során azt tapasztaltuk, hogy 20 előnyös, ha a foszforsav valamely kalciumsóját, különösen kalciumhidrogénfoszfátot használunk. A termék homogenizálását elvégezhetjük két lépésben is, ahol a második lépés mikronizálás. A termék megfelelő enzimaktivitású, magas zsírtar-25 talmú. Ez a zsírmennyiség a fehérje-és keményítőbontó enzimaktivitást nem befolyásolja [Libicky és munkatársai : Ceskoslov, Farm. 22, 145 (1973)], a lipolitikus aktivitásérték szempontjából pedig előnyösnek mondható. A találmány szerinti pankreászpor-lipáz aktivitása a kö-30 vetkező termékével azonos: Pancreatin B grade (Activity: Approx. 6 X NF (CALBIOCHEM). A végtermék 30% zsírtartalma ellenére vízben jól oldódik, ami a mikronizálás következménye. Tapasztalataink szerint a tárolás alatt nem romlik, aktivitása nem csökken jelen-35 tős mértékben és antioxidáns adagolását sem igényli. Az alkalmazott szárítási művelet lehetővé teszi a csak vizes fázisban végzett technológiai lépéseket. A drága és tűzveszélyes szerves oldószeres zsírtalanítás és ezzel egyidejűleg a fehérjefrakció dúsítása a felhasználó igénye 40 szerint a poralakú termék esetében utólag is történhet. Az egészségre nem ártalmas, de megfelelő baktericid hatású tartósítószer hozzáadásával elkerülhető azenzimaktivitás mértékét veszélyeztető baktériummentesitési eljárás. 45 A találmány szerinti eljárást az alábbiakban részletesen ismertetjük. A pankreász vágóhídi gyűjtését úgy kell megszervezni, hogy a szerv fagyasztása az állatok elvéreztetésétől számított legrövidebb időn belül (30—90 perc) megtörtén-50 jék. A legalább -10 C° hőmérsékletre lehűtött hasnyálmirigyet — az autolízis elkerülése végett — a tárolás és a feldolgozás teljes időtartama alatt mélyhűtésre alkalmas hűtőláncban kell tartani; így elérhetjük, hogy a hatóanyagveszteség a lehető legkisebb legyen. A szerv 55 péppé őrlése legfeljebb +4 C°-ra felengedve azt késes daráló segítségével (1), illetve mélyhűtött állapotban golyós vagy kalapácsos malom felhasználásával (2) történhet. A pankreásszal együtt duodenumot, illetve friss és megfelelően preparált bélkaparékot homogenizálunk a 60 hasnyálmirigyben proenzim formában levő enzimek aktiválása céljából. A keletkezett pépet az (1) eljárás alkalmazásakor az őrlési folyamatot követően, a (2) módszersorán az őrlési folyamattal egyidejűleg csapvízzeil hígítjuk, a rostos szövetmaradékokat eltávolítjuk, és a 65 foszforsav valamely kalciumsóját, előnyösen kalcium-2