169664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aszimmetriás nyílt szénláncú cisztin-tartalmú peptidek előállítására
169664 11 12 a) BOC-Tyr-Cys-Asn-OtBu I Bpoc-Leu-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 340 mg BOC-Tyr-OH-hoz 5 ml abszolút tetrahidrofuránban -10 C°-on hozzáadunk 1,3 ml tetrahidro- 5 furánnal készített n trietil-amint és 1,3 ml, tetrahidrofuránnal készített n izobutil-klórkarbonátot. 15 percen át -10 C°-on állni hagyjuk, majd összekeverjük !> 18 8 H-Cys-Asn-OtBu 10 I Bpoc-Leu-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 . HCl-lel és 1,0 ml, tetrahidrofuránnal készített n trietil-aminnal 15 ml 7) BOC-Val-Gln(OtBu)-Ala-Leu-Tyn 0,46 g BOC-Val-Glu(OtBu)-Ala-Leu-Tyr-NH—NH2 -t 5 ml dimetil-formamidban —10 C°-on össze- 20 keverünk 0,75 ml etil-acetáttal készített 2 n sósavval és 0,72 ml etil-acetáttal készített n terc-butil-nitrittel. 15 percen át -10 C°-on állni hagyjuk, majd hozzáadjuk 0,60 g ß) pontban leírt termék és 2 ml etü-acetáttal készített n trietil-amin 7 ml dimetil- 25 formamiddal készített oldatát. Az elegyet egy órán át -10 C°-on és 15 órán át 20 C°-on állni hagyjuk, majd 100 ml vízbe csepegtetjük keverés közben, leszűrjük és a csapadékot metanol-éter elegyből végzett átkristályosítással tisztítjuk. Rf = 0,35 kloroform-metanol 30 8:2 elegyben. 4. példa BOC-Tyr-Cys-Asn-OtBu 35 Trt-Leu-Val-Cys-Gly-OH 1. Trt-Leu-Val-Cys(SCM)-Gly-OH 4,3 g Trt-Leu-Val-Cys(Trt)-Gly-OH és 0,515 ml dietil-amin 35 ml kloroformmal és 15 ml metanollal készített oldatát —10 C°-on összekeverjük 0,88 ml 40 Cl-S-CO-OCH3 -mal. 15 percen át -10 C°-on állni hagyjuk, majd hozzáadunk 0,6 ml dietil-amint, a hűtést eltávolítjuk és 5 perc múlva felhígítjuk 150 ml kloroformmal. Az oldatot híg citromsav-oldattal és vízzel mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd 45 körülbelül 10 ml térfogatra bepároljuk. Petroléter hozzáadásával lecsapjuk a Trt—Leu—Val-Cys(SOM)—Gly-OH-t. Kloroform-petroléter elegyből átkristályosítjuk, olvadáspont: 195-200 °C (bomlás). Kitermelés: 3,05 g. 50 A kiindulási anyagként alkalmazott Trt—Leu—Val-Cys(Trt)-Gly-OH-t az alábbi módon állíthatjuk elő. Trt-Cys(Trt)-Gly-OMe 55 56,24 g Trt-Cys(Trt)-OSu-t és 8,01 g Gly-OMe-t feloldunk 150 ml kloroformban. 15 órán át 20 C°-on állni hagyjuk, majd az oldatot bepároljuk, a maradékot felvesszük 500 ml etil-acetátban és ezt az oldatot híg citromsav-oldattal és vízzel mossuk. Nátrium-szul- 60 fát felett végzett szárítás után az oldószert lepároljuk és a maradékot etil-acetát-n-hexán elegyből végzett átkristályosítással tisztítjuk. Rf = 0,70 kloroformmetanol 95:5 elegyben. H-Cys(Trt)-Gly-OMe 65 tetrahidrofuránban. Az elegyet egy órán át —10 C°-on és 15 órán át 20 C°-on állni hagyjuk, majd leszűrjük, a szűrletet bepároljuk és a maradékot kloroform-éter elegyből átkristályosítjuk Rf = 0,35 kloroform-metaanol 9:1 elegyben. 0) H-BOC-Tyr-Cys-Asn-OtBu | . acetát H-Leu-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 1,5 g a) pontban leírt terméket felveszünk 12 ml jégecetben és 3 ml vízben és egy órán át 45 C°-on tartjuk. Ezután hozzáadunk 10 ml jégecetet és liofilizáljuk. A keletkező port kétszer 5 ml petroléterrel eldörzsöljük. Rf = 0,40 kloroform-metanol 8:2 elegy ^ ben. BOC-Tyr- Cys-Asn-OtBu I -Leu-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 6,8 g Trt-Cys(Trt)-Gly-OMe 75 ml metanollal készített oldatát cseppenként összekeverjük 7,5 ml vízzel és 5,1 ml 2,1 n sósavval. Az elegyet egy órán át 20 C°-on állni hagyjuk, majd az oldatot körülbelül 20 ml térfogatra bepároljuk, 150 ml etil-acetátban felvesszük és 0,5 n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk. A nátrium-szulfát felett szárított oldatot bepároljuk és a maradékot eldörzsöljük 20 ml petroléterrel. Vékonyréteg kromatográfiásan egységes olajszerű anyagot kapunk. Rf = 0,50 kloroformmetanol 96:5 elegyben. Trt-Leu-Val-Cys(Trt)-Gly-OMe 4,72 g Trt-Leu-Val-OH-t és 4,35 g H—Cys(Trt)—Gly—OMe-t 50 ml kloroformban összekeverünk 0,4 g 1-hidroxi-benztriazollal és 2,26 g diciklohexil-karbodiimiddel. 15 órán keresztül 20 C°-on állni hagyjuk, majd leszűrjük, a szűrletet 50 ml kloroformmal felhígítjuk és az oldatot híg citromsavoldattal 0,5 n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk. A nátrium-szulfát felett szárított oldatot bepároljuk és a maradékot melegítés közben feloldjuk 30 ml kloroform-metanol 1:1 elegyben. Néhány csepp éter hozzáadása után a termék kikristályosodik. Olvadáspont: 252-254 °C. Trt-Leu-Val-Cys(Trt)-Gly-OH 7,12 g Trt-Leu-Val-Cys(Trt)-Gly-OMe-t melegítés közben feloldunk 80 ml dioxánban. 20 C°-on hozzácsepegtetünk 4,5 ml 2 n nátrium-hidroxid-oldatot és 10 ml vizet. 50 percen keresztül 20 C°-on állni hagyjuk, majd az oldatot körülbelül 30 ml térfogatra bepároljuk és 0 C°-on keverés közben összekeverjük 20 ml n citromsav-oldattal és 100 ml vízzel. A csapadékot leszűrjük, hideg vízzel mossuk és foszforpentoxid, valamint nátrium-hidroxid felett szárítjuk. Vékonyréteg kromatográfiásan tiszta, fehér port kapunk. Rf = 0,60 kloroform-metanol 1:1 elegyben. 2. H-Cys-Asn-OtBu I Trt-Leu-Val-Cys-Gly-OH 710 mg Trt-Leu-Val-Cys(SCM)-Gly-OH-t és 330 mg H-Cys-Asn-OtBu.HCl-t feloldunk 5 ml kloroformban és 5 ml metanolban. Egy órán át 20 C°-on állni hagyjuk, majd az oldatot bepároljuk és a maradékot 0 C°-on eldörzsöljük 10 ml vízzel és leszűrjük. Vékonyréteg kromatográfiásan tiszta terméket kapunk színtelen por alakjában. Rf 100 = 0,3. Kitermelés: 0,89 g. 6
