169664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aszimmetriás nyílt szénláncú cisztin-tartalmú peptidek előállítására
169664 10 etil-acetátban és 50 ml vizben felvesszük és n citromsav-oldattal pH = 3-ra beállítjuk. Az etil-acetátos fázist vízzel mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk. Kloroform-petroléterből kristályosítva Trt-Cys(Acm)-OH-t kapunk 143-145 °C olvadásponttal. 0) Trt-Cys(Acm)-Asn-OtBu 2,17 g Trt-Cys(Acm)-OH-t és 0,9 g H-Asn-OtBu-t 30 ml dimetil-formamidban feloldunk és 0 C°-on összekeverjük 1,1 g diciklohexil-karbodiimiddel. 15 órán át 5 C°-on állni hagyjuk, majd leszűrjük, a szűrletet 35 C°-on és 0,01 torr nyomáson bepároljuk, a maradékot 200 ml etil-acetátban felvesszük és félig telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. Ezután nátrium-szulfát felett szárítjuk, bepároljuk és a kapott terméket etil-acetát-hexán elegyből átkristályosítjuk. Rf = 0,25 kloroform-metanol 49:1 elegyben. y) H-Cys(Acm)-Asn-OtBu.HCl 2,5 g Trt-Cys(Acm)-Asn-OtBu-t 25 ml 80%-os ecetsavban az l.a) pontban ismertetett módon detritilezünk és feldolgozzuk. 1,85 g tiszta H—Cys(Acm)— Asn-OtBu.HCl-t kapunk. Rf = 0,30 kloroform-metanol 8:2 elegyben. 2. H-Cys-Asn-OtBu.HCl I BOC-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 1,25 g H-Cys(SCM)-Asn-OtBu.HCl-t és 1,56 g BOC-Cys-Gli-Glu(OtBu)2 -t egy órán át szobahőmérsékleten állni hagyunk 30 ml kloroform-metanol 1:1 elegyben. Ezután a tiszta oldatot 35 C°-on, vízsugárszivattyúval előállított vákuumban bepároljuk és a maradékot kétszer eldörzsöljük 5-5 ml petroléterrel. Vékonyréteg kromatográfiásan tiszta terméket kapunk színtelen por alakjában. Kitermelés: 2,45 g; Rf = 0,50 kloroform-metanol 8:2 elegyben. A terméket példaképpen az alábbi módon használhatjuk peptidszintézishez. BOC-Tyr-Cys-Asn-OtBu I BOC-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 620 mg BOC-Tyr-OH-hoz 10 ml tetrahidrofuránban -15 C°-on hozzáadunk 2,2 ml tetrahidrofuránnal készített n trietil-amint és 2,2 ml, tetrahidrofuránnal készített n izobutil-klórkarbonátot. 10 perc múlva -10 C°-on hozzáadunk 1,69 g H-Cys-Asn-OtBu.HCl BOC-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 és 0,28 ml trietil-amint 15 ml tetrahidrofuránban, majd egy órán keresztül —10 C°-on és 15 órán keresztül szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldatot szűrjük, a szűrletet bepároljuk, a maradékot felvesszük 200 ml etil-acetátban és 0,1 n citromsavoldattal 0,1 n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk. Ezt követően nátrium-szulfát felett szárítjuk, bepároljuk és a maradékot etil-acetát-hexán elegyből kicsapjuk. így 1,9 g fenti képletű tiszta terméket kapunk. Rf = 0,46 kloroform-metanol 9:1 elegyben. 3. példa H-Cys-Asn-OtBu .HCl Bpoc-Leu-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 5' : 0,83 g H-Cys(SCM)-Asn-OtBu.HCl-t és 1>70 g Bpoc-Leu-Val-Cys-Gly-Glu-(OtBu)2 -t feloldunk 20 ml kloroform-metanol 1:1 elegyben és az oldatot egy óra múlva 20 C°-on bepároljuk. A maradékot 10 metanoléterből lecsapjuk. Kitermelés: 2,23 g. Rf = 0,45 kloroform-metanol 8:2 elegyben. A kiindulási anyagot az alábbi módon állíthatjuk elő. a) Bpoc-Leu-Val-OME 15 36,9 g Bpoc-Leu-OH-t és 13,9 ml trietil-amint 300 ml acetonitrilben -10 C°-on összekeverünk 13,3 ml izobutil-klórkarbonáttal. 10 perc múlva —10 C°-on hozzáadunk 16,8 g H-Val-OME.HCl-t és 13,9 ml trietil-amint 170 ml acetonitrilben és egy órán át -10 20 C°-on és 10 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a maradékot etil-acetátban felvesszük, az oldatot híg átromsav-oldattal, 0,5 g nátrium-hidrogén-karbonátoldattal és vízzel mossuk. Ezután nátrium-szulfát 25 felett szárítjuk, bepároljuk és a maradékot etil-acetáthexán eleggyel lecsapjuk. Rf = 0,45 ecetészter-hexán 1:1 elegyben. b) Bpoc-Leu-Val-OH 39 g Bpoc-Leu-Val-OMe-t 400 ml dioxánban 30 feloldunk, hozzáadunk 100 ml vizet és 130 ml n nátrium-hidroxid-oldatot, majd egy órán át 20 C°-on állni hagyjuk. Ezt követően a dioxánt 30 C°-on rotációs bepárlóban lepároljuk, hozzáadunk 300 ml jeges vizet és kloroformot és 0 C°-on keverés közben 35 130 ml n sósavat. A kloroformos oldatot elválasztjuk, háromszor mossuk félig telített nátrium-klorid-oldattal. Ezután nátrium-szulfát felett szárítjuk és az oldószert ledesztilláljuk. így vékonyréteg kromatográfiásan tiszta Bpoc-Leu-Val-OH-t kapunk. Rf = 40 0,40 kloroform-metanol 7:3 elegyben. c) Bpoc-Leu-Val-Cys(Trt)-Gly-Glu(OtBu)2 4,5 g Bpoc-Leu—Val-OH-hoz és 6,6 g H-Cys(Trt)-Gly-Glu(OtBu)2 -hoz 100 ml dimetilformamidban 0 C°-on hozzáadunk 2,47 g diciklo-45 hexil-karbodiimidet és 1,6 g 1-hidroxi-benztiazolt. Ezután egy órán át 0 C°-on és 15 órán át 20 C°-on állni hagyjuk, majd leszűrjük, és a szűrletet 40 C°-on és 0,01 torr nyomáson bepároljuk. A maradékot etil-acetátban felvesszük és 0,5 n citromsav-oldattal 50 0,5 n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk. Nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd bepároljuk és a maradékot etilacetát-hexán elegyből kicsapjuk. Rf = 0,55 kloroform-metanol 19:1 elegyben. d) Bpoc-Leu-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 55 2,2 g Bpoc-Leu-Val-Cys(Trt)-Gly-Glu(OtBu)2 -hoz 15 ml etil-acetátban és 7 ml metanolban 0,7 g higany(H)-acetátot adunk és 4 órán keresztül 20 C°-on állni hagyjuk. Ezután 15 percen keresztül kén-hidrogén-gázt bocsátunk át rajta, szűrjük és a 60 szűrletet bepároljuk. A terméket az alábbi módon használhatjuk fel a BOC-Tyr-Cys-Asn-OtBu BOC-Val-Gln(OtBu)-Ala-Leu-Tyr-Leu-Val-Cys-Gly-Glu(OtBu)2 szintéziséhez. 5
