169501. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Nalfa-amino-védőcsoportok szelektív hasítására peptidek szintézisénél

11 169501 12 oldatból kicsapjuk és ezután forró metanolból átkristályosítjuk. Olvadáspont 229-231°. A katalitikus hidrogénezést 30 ml trifluor-etanolban 0,15 g palládium/szén (10%-os) katalizátor jelenlétében végezzük, mikoris a pH ._ értékét metanolban levő 5 0,7 n sósavval egy pH mérő segítségével 4,5-n tartjuk. Az Rf érték a 100 jelű rendszerben 0,35. 15. Bpoc-Tyr(But)-Gln-Leu-Glu(OBut)- 10 -Asn-Tyr(But)-OMe 4,85 g Bpoc-Tyr(But)-OPcp-t és 5,56 g H-Gln-Lev-Glu(OBut)-Asn-Tyr(But)-OMe-hidrokloridot 40 ml dimetil-formamidban 0,94 ml trietilaminnal 15 elegyítünk és 20 órán át 20°-on reagáltatjuk. A reakció oldatot ezután bepároljúk és a maradékot metanol és éter elegyéből történő kicsapással tisztítjuk. Az Rf érték kloroform és metanol 4:1 arányú elegyében 0,65. 20 16. Bpoc-Tyr(But)-Gln-Leu-Glu(OBut)-Asn-Tyr(But)-NH-NH2 Az előző metilészter 2,5'g-ját 30 ml dimetilfor- 25 mamidban oldjuk és 0°-on 3,0 ml hidrazin-hidráttal elegyítjük. 16 óra múlva 20°-on a terméket 200 ml víz hozzáadásával kicsapjuk, leszűrjük és kálium-hidroxid felett szárítjuk. Az Rf érték kloroform és metanol 7:3 arányú elegyében 0,60. 30 17. A (II) képletű vegyület előállítása 1,87 g Bpoc-Tyr(But)-Gln-Leu-Glu(OBut)-Asn- 35 -Tyr(But)-hidrazint 15 ml dimetil-formamidban oldunk és —15°-on 1,3 ml etilacetátban levő 2,84 n sósavval és 0,208 ml terc-butilnitrillel elegyítünk. 10 perc múlva —15°-on 15 ml dimetil-formamidban levő 1,52 g IIa képletű vegyületet (v.o. 785 933 40 számú belga szabadalmi leírás) és 1,0 ml N-etil-morfolint adunk hozzá. Miután -10°-on 1 órát, 4°-on pedig 15 órát állni hagytuk, az oldatot 0°-on 150 ml 1%-os ecetsavba öntjük, a csapadékot leszűrjük és ellenáramú extrakcióval metanol —0,1 45 mólos ammónium-acetát (7 pH-jú)-kloroform-széntetraklorid 10:3:5:4 arányú rendszerében tisztítjuk. K értéke 0,3. Az Rf érték a 45 jelű rendszerben 0,60. 50 18. Az (I) képletű vegyület előállítása 60 ml dimetil-formamidban levő 4,28 g (III) képletű vegyületet és 3,58 g H-Glu(OBut>Arg-Gly- 55 -Phe-Phe-Tyr(But)-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But> -OBut-ot 0,4 g N-hidroxi-benzotriazollal és 2,06 g diciklohexil-karbodiimiddel keverünk össze és 2 órán át 40°-on tartunk. A reakció oldatot ezután kb. 30ml-re betöményítjük, szűrjük és 250 ml 60 vízbe öntjük. A csapadékot leszűrjük, és ellenáramú extrakcióval metanol-0,1 mól ammónium-acetát (7 pH-jü)-kloroform-széntetraklorin 10 :3 : 5 :4 arányú rendszerében tisztítunk. A K érték 0,06. Az Rf érték a 45 jelű rendszerbén 0,55. 65 2. példa Az 1. példa szerinti (I) képletű vegyület 120mg-jából indulunk ki, amelyben azonban a 2-(p-bifenilil)-2-izopropiloxi-karbonil(Bpoc) védőcsoportot a 2-fenil-izopropiloxi-karbonil csoporttal helyettesítjük. Az 1. példában leírttal azonos módon a megfelelő dez-tritil-peptidet kapjuk. (105 mg) A vékonyréteg kromatogram szilikagélen a következő Rf értékeket mutatja. Rf45 = 0,47 (tritillel védett terméknél: 0,53) Rf 100 = 0,60 (tritillel védett terméknél: 0,90) Rf kloroform és metanol 8 : 2 arányú elegyében = 0,24 (tritillel védett terméknél: 0,37) 3. példa A 2-(p-bifenilil)-2-izopropiloxi-karbonilcsoport (Bpoc) szelektív hasítása a Bpoc-Ser(But)-Cys-(Trt)-Val-Leu-OMe-ből 0,61 g Bpoc-Ser(But)-Thr(But)-Cys(Trt)-Val-Leu-OMe-t (v.o. 1259 017 számú Nagy-britanniai szabadalmi leírás) 10 ml trifluor-etanol és víz 9:1 térfogat arányú elegyében oldunk. 2,2,2-trifluor-etanol és víz 4:1 térfogat arányú elegyében levő 0,05 n sósavval a pH-t 0,5-re állítjuk és a pH-szabályozóval ezen az értéken tartjuk. Ha további savat már nem vesz fel (kb. 40 perc után) 1 ml piridint adunk hozzá, az oldatot bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük. Ez vékonyrétegkromatográfiásán egységes terméket eredményez, a H-Ser(But)-Thr(But)-Cys(Trt)-Val-Leu-OMe-t, amelynek Rf értéke kloroform és aceton 1 :1 arányú elegyében 0,50. Kitermelés: 50 mg. 4. példa Az N-tritilcsoport szelektív hasítása a Trt-Leu-Val-Cys(Trt)-Gly-OMe-ből 1,2 g Trt-Leu-Val-Cys(Trt)-Gly-OMe-t (v.o. 785 933 számú belga szabadalmi leírás) 100 ml trifluor-etanol és víz 9 :1 térfogat arányú elegyével felvesszük, 4:1 térfogat arányú 2,2,2-trifluor-etanol-víz elegyében levő 0,05 n sósav-oldattal a pH-t 4-re állítjuk és a pH szabályozóval ezen az értéken tartjuk. A savfelvétel befejeződése után (kb. 20 perc) 2 ml piridint adunk hozzá és az oldatot bepároljuk. A H-Leu-Val-Cys(Trt)-Gly-OMe éterrel nyert maradékának vékonyrétegkromatogramja egységes. Az Rf érték toluol és aceton 1 :1 arányú elegyében 0,45. Kitermelés: 0,875 mg. 5. példa A 4. példában megnevezett vegyületből lehasítjuk az N-tritil-csoportot, oly módon, hogy a terméket 0,5 ml tömény sósavval és 120 ml 2,2,2-trifluor-etanollal pH = 4 értékre állítjuk és ezen az értéken tartjuk. A feldolgozást a 4. példában ismertetettel azonos módon végezzük.