169501. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Nalfa-amino-védőcsoportok szelektív hasítására peptidek szintézisénél

169501 10 méket kromatográfiásan szilikagélen tisztítjuk. A Z-Phe-Tyr(But)-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But>terc-butilésztert etilacetáttal eluáljuk vékonyréteg kromatográfiásan egységes alakban. Az Rf érték etilacetátban mérve 0,40. A hidrogénezést a Z csoport 5 lehasítására 100 ml metanolban 1,0 g palládium/szén (10%-os) katalizátor jelenlétében végezzük. Az Rf érték kloroform és metanol 9 :1 arányú elegyében mérve 0,30. 10 H-Phe-Phe-Tyr(But)-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-OBut Az 5. pontban leírt módon 2,36 g Z-Phe-N-hidroxil-szukcinimid-észtert és 6,0 g N-Phe-Tyr(But)- is -Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-butilésztert reagáltatunk 30 ml etilacetátban, izoláljuk és tisztítjuk. Az Rf érték etilacetátban mérve 0,50. A Z-Phe-Phe-Tyr(But>Thr(But>Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-butilészter katalitikus hidrogénezését 60 ml 20 metanolban 0,8 g paládium/szén (10%-os) katalizátor jelenlétében végezzük. Az Rf érték toluol-aceton 1 :1 arányú elegyében mérve 0,45. 7. H-Arg-Gly-OMe • HCl 8. Z-Glu(OBut)-Arg-Gly-OMe • HCl 9. Z-Glu(OBut)-Arg-Gly-OH 25 20 ml dimetil-formamidban (DMF) levő 1,54 g Z-Arginint és 0,63 g H-Gly-OMe-hidrokloridot 0°-on 1,14 g diciklohexil-karbodiimiddel (DCC1) keverünk össze és 15 órán át 20°-on reagáltatjuk. A reak- 30 cióelegyet leszűrjük, a szűrletet bepároljuk és a maradékot 50 ml vízzel keverjük. Az oldhatatlan diciklohexil-karbamidot leszűrjük és a szűrletet liofilizáljuk. Az Rf érték kloroform-metanol 1 :1 arányú elegyében mérve 0,50. A Z-Arg-Gly-OMe- 35 -hidroklorid hidrogénezését 30 ml metanolban 0,5 g palládium/szén (10%-os) jelenlétében végezzük. 40 20 ml dimetil-formamidban levő 1,69 g Z-Glu(OBut)-OH-t, 1,50 g H-Arg-Gly-OMe-hidrokloridot és 1,14 g diciklohexil-karbodiimidet 2 órán át 0°-on és 22 órán át 4°-on reagáltatunk. Ezután leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a maradékot metanol-éter 45 elegyéből kicsapjuk. Az Rf érték 1 :1 arányú kloroform-metanol elegyben 0,50. 50 50 ml metanolban levő 12,02 g Z-Glu(OBut)-Arg-Gly-OMe4údrokloridot és 30 ml vizet pH ellenőrzés mellett ll,4pH-nál 2,0n nátrium-hidroxid-oldattal elszappanosítunk (időtartam: 1 és 1/4 óra). A pH értékét 1,0 n sósavval 6,7-re állít- 55 juk, a metanolt ledesztilláljuk és a maradékot 20 órán át 0°-on tartjuk. Leszűrjük és kálium-hidroxid felett szárítjuk. Az Rf érték a 87 jelű elegyben 0,60. 60 10. H-Glu(OBut)-Arg-Gly-Phe-Phe-TVr(But)-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-OBut 30 ml dimetil-formamidban levő 1,11 g Z-Glu(OBut)-Arg-Glicinhez 0°-on 1,025 ml 2,15 n sósavat 65 tartalmazó etilacetátot, 2,40 g H-Phe-Phe-Tyr(But> -Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-butilésztert 0,1 g N-hidroxil-benzotriazolt és 0,45 g diciklohexil-karbodiimidet adunk. A reakcióelegyet 0°-on 2 órás és 20° on 20 órás állás után leszűrjük és a szűrietet bepároljuk. A maradékot ellenáramú extrakcióval metanol, puffer, kloroform, széntetraklorid 10 + 3 + 5 + 4 összetételű elegyében tisztítjuk. (A puffer összetétele: 38,6 g ammónium-acetát és 57,2 ml jégecet vízzel két literre feltöltve). K értéke 0,3. Az Rf érték a 43 jelű rendszerben 0,55. így kapjuk a Z-Glu(OBut)-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr(But)-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-butilésztert. A benziloxi-karbonilcsoport lehasítására 50 ml 90%-os metanolban 0,2 g palládium/szén (10%-os) katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. Az Rf érték a 100 jelű rendszerben 0,30. 11. H-Asn-Tyr(But)-OMe 7,75 g Z-Asn-p-nitrofenil-észtert és 5,0 g H-Tyr-(But)-OMe vegyületet 60 ml dimetil-formamidban 20°-on 15 órán át reagáltatunk. Az oldatot ezután bepároljuk, a maradékot 50 ml metanolban oldjuk és 300 ml éterben kicsapjuk. A csapadékot metanolból átkristályosítjuk. Olvadáspont 173-175°. Z-Asn-Tyr(But)-OMe vegyület katalitikus hidrogénezését 400 ml metanolban 3,0 g palládium/szén (10%-os) jelenlétében végezzük. Az Rf érték kloroform-metanol 4 : 1 arányú elegyében 0,40. 12. H-Glu(OBut)-Asn-Tyr(But)-OMe . 1,85 g Z-Glu(OBut)-p-nitrofenil-észtert és 1,49 g H-Asn-Tyr(But)-OMe vegyületet 30 ml dimetil-formamidban 24 órán át 20°-on reagáltatunk. A Z-Glu(OBut)-Asn-Tyr(But)-OMe vegyületet a 11. pontban leírt módon izoláljuk. Izopropilalkoholból átkristályosítjuk. Olvadáspont 192-195°. A katalitikus hidrogénezést 100 ml metanolban 0,2 g palládium/szén (10%-os) jelenlétében végezzük. Az Rf érték kloroform-metanol 7 :3 arányú elegyében 0,45. 13. H-Leu-Glu(OBut)-Asn-Tyr(But)-OMe 0,97 g Z-Leu-p-nitrofenil-észtert és 1,34 g H-Glu(OBut)-Asn-Tyr(But)-OMe vegyületet 5 ml dimetil-formamidban 20 órán át 20°-on reagáltatunk. A reakció oldathoz 50 ml étert adunk, leszűrjük és a maradék Z-Leu-Glu(OBut)-Asn-Tyr(But)-OMe vegyületet etilacetáttal mossuk. Az Rf érték 9 :1 arányú kloroform-metanol elegyben 0,50. A Z csoport lehasítását katalitikus hidrogénezéssel végezzük 60 ml metanolban 0,2 g palládium/szén (10%-os) katalizátor jelenlétében. Az Rf érték kloroform-metanol 7 :3 arányú elegyében 0,60. 14. H-Gln-Leu-Glu(OBut)-Asn-Tyr(But)-OMe 0,60 g Z-Gln-o-nitrofenil-észtert és 0,99 g H-Leu-Glu(OBut)-Asn-Tyr{But)-OMe vegyületet 10 ml dimetil-formamidban reagáltatunk 15 órán át 20°-on. A Z-Gln-Leu-Glu(OBut)-Asn-Tyr(But)-OMe vegyület termékét éter hozzáadásával a reakciós