169501. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Nalfa-amino-védőcsoportok szelektív hasítására peptidek szintézisénél
7 169501 8 1. példa 2. H-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-OBut Az N^tritilcsoport szelektív lehasítása az (I) képletű emberi inzulin A17-21_BI7-30 frag. mentumában. Az (I) képletű vegyület vékonyréteg kromatogramja szilikagélen: Rf45 =0,55, RfS2 =0,76, Rf 100 =0,91. Rf (kloroform-metanol 8 :2 arányú elegyében) = 0,38. Az (I) képletű vegyület acetátjának 114mg-ját 0,6 ml kloroform-metanol 1 :1 arányú elegyében oldjuk és 12 ml trifluor-etanol és víz 9 :1 térfogatarányú elegyéhez adjuk. A reakcióedényt egy üvegelektródával látjuk el (Fa. Metrohm gyártmány, EA 147X típus), amelyet egy automatikus pH-mérővel kapcsolunk össze. Az (I) képletű vegyület hozzáadása után rögtön a pH-értéket 4,5-re állítjuk, amelyet 80%-os 2,2,2-trifluor-etanolban levő 0,05 n sósav hozzáadásával pH-mérő segítségével érünk el. A savfelhasználás után 15 perc múlva nyugalmi állapot jön létre. Ez azt mutatja, hogy a tritilcsoport lehasadása befejeződött. Ezt vékonyrétegkromatográfiával (lásd alább) állapítjuk meg. Az oldathoz 1 ml piridint adunk, vákuumban szárazra pároljuk és a maradékot éterrel elkeverjük a trifenil-karbinol és a tritil-trifluor-etiléter eltávolítására, leszűrjük és szárítjuk. A maradék 103 mg [az (I) képletű vegyület deztritil-származéka, hidroklorid alakban] vékonyréteg kromatogrammja szilikagélen a következő Rf értéket mutatja: Rendszer 45 52 100 kloroform-metanol 8 :2 arányú elegye Rf értéke 0,49 0,59 0,60 0,25 A kiindulási anyagot a következő képpen állítjuk elő: 1. H-Lys-(Boc)-Thr(But)-OBut 11,4 g Z-Lys(Boc-OH-t és 6,1 g H-Thr(But)-terc-butilésztert oldunk 170 ml kloroformban és 0C°-on 1,35 g N-hidroxi-benzotriazoM (HoBt) és 6,6 g diciklohexil-karbodiimiddel (DCC1) elegyítjük. Ezt 22 óra múlva 4° hőmérsékleten leszűrjük, a szűrlétet 5%-os citromsav-oldattal, 0,5 n nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, és vízzel mossuk. Szárítás és bepárlás után Z-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-butilésztert kapunk. Az Rf érték ecetsavban 0,60. Katalitikus hidrogénezéssel H-Lys-(Boc)-Thr(But)-terc-butilésztert kapunk 200 ml metanolban l,0g palládium/szén (10%-os) katalizátor jelenlétében. Az Rf érték kloroform-metanol 9:1 arányú elegyében mérve 0,40. 50 ml etilacetátban levő 2,82 g Z-Pro-OH vegyülethez -10C°-on 1,58 ml trietil-amint és 1,50 ml 5 izobutil-klórkarbonátot adunk. 10 perc múlva -10°-on 50 ml etilacetátban levő 5,80 g H-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-bütilészterrel elegyítjük. Ezután 1 órát -10C°-on és 20 órán át 4°-on hagyjuk állni, és ezután az oldatot 5%-os citromsav-10 -oldattal, 0,5 n nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A maradékot (Z-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)OBut) éter és petroléter elegyéből kristályosítjuk. Olvadáspont 100-103°. A benziloxi-karbonilcso-15 port lehasításat 100 ml ecetsavban történő hidrogénezéssel 0,5 g palládium/szén (10%-os) katalizátor jelenlétében végezzük. A termék kloroform-metanol 7 :3 arányú elegyében mért Rf értéke 0,45. 20 3. H-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-OBut 4,07 g Z-Thr-(But>N-hidroxil-szukcinimid-észtert és 5,57 g H-Pro-Lys-(Boc)-Thr(But)-terc-butilésztert 30 ml etil-acetátban oldunk. 24 óra múlva 20°on 25 100 ml etilacetáttal hígítjuk és az oldatot 5%-os citromsav-oldattal, 0,5 n nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk. Szárítás és bepárlás után Z-Thr(But)-Pro-Lys(Boc>Thr(But)-terc-butilésztert kapunk, amelyet éter és petroléter elegyéből át-30 kristályosítva tisztítunk. Az Rf etilacetátban mérve 0,35. A H-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-butilésztert 100 ml metanolban történő hidrogénezéssel 0,8 g palládium/szén (10%-os) katalizátor jelenlétében kapjuk. Az Rf érték kloroform-metanol 35 9 :1 arányú elegyében mérve 0,20. 4. H-Tyr(But)-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-OBut 40 11,13 g Z-Tyr(But)-N-hidroxil-szukcinimidésztert és 16,4 g H-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-butilésztert 150 ml etilaceíátban 20 óra alatt 20°-on reagáltatunk. 200 ml etílacetátos hígítás után az oldatot 5%-os citromsav-oldattal 0,5 n nátrium-hid-45 rogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk, Etilacetát-petroléter elegyéből kicsapva egységes Z-Tyr(But)-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-butUésztert kapunk. Az Rf érték etilacetátban mérve 0,50. A 50 katalitikus hidrogénezést H-Tyr(But)-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-butilészterré 200 ml metanolban 1,5 g palládium/szén (10%-os) jelenlétében végezzük. Az Rf érték kloroform metanol 4:1 arányú elegyében mérve 0,55. 55 5. H-Phe-Tyr(But)-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-OBut 2,65 g Z-Phe-N-hidroxil-szukcinimidet és 5,95 g 60 H-Tyr(But)-Thr(But)-Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-terc-butilésztert 30 ml etilacetátban 20 órán át 20°-on reagáltatunk. Az oldatot ezután 70 ml etilacetáttal hígítjuk, 5%-os citromsav-oldattal, 0,5 n nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, nát-65 rium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A ter-
