169449. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7béta-(D-2-amino-2-fenil- acetamido)- 3-metil-3-cefem-4-karbonsav előállítására
7 169449 8 mossuk. A szerves oldatot szárítjuk, és 1 x 60 cm szilikagél oszlopon csurgatjuk át, majd az oszlopot 1250 ml diklórmetánnal eluáljuk. Az eluátum megfelelő frakcióit egyesítjük és bepárolva 2,0 g (21%-os kitermelés) habos szilárd anyagot állítunk elő, amely DACVMME-nek felel meg. 5. módszer A gyűrűnyitási reakciót 5 g PVSOMME-ből végezzük 50 ml dioxánban 10 g porított molekulaszitával és 0,5 g piridin-toziláttal visszacsepegés hőmérsékletén 18 órán keresztül. Lehűtés és szűrés után 20 ml 6N sósav oldatot adunk a reakcióelegyhez, és az így előalított keveréket kb. 25 C -on tartjuk körülbelül 1-2 órán keresztül a metoximetilészter hidrolízise céljából. A keveréket ezután 50 ml vízzel hígítjuk, háromszor 50 ml diklórmetánnal extraháljuk, és az egyesített diklórmetános oldatokat háromszor 50 ml pH = 7-es puffer oldattal extraháljuk. Az egyesített puffer oldatok pH-ját 1,5-ré állítjuk sósavval és háromszor 30 ml etilacetáttal extraháljuk. Az egyesített etilacetátos oldatot bepárolva habos szilárd anyagot állítunk elő, amelyet 30 ml metanolban vesszük fel, és dibenzilaminnal elegyítjük. 0C -on, 15 órán keresztül történő kristályosítás után 2,6 g (48%-os kitermelés) DACV-dibenzilamin-sót (amely az autentikus mintával azonos) állítunk elő. C) Metoximetil-3-metil-7-j3-fenoxiacetamidocef-3-ém-4-karboxilát 20,0 g (57,4 mól) 3-metil-7-|3-fenoxiacetamidocef-3-ém-4-karbonsav (72/06193 számú holland szabadalom, Farmdoc 76,350T) 300 ml száraz metilénkloriddal készült oldatát 0-5 C°-ra hűtjük és nitrogén atmoszférán egy részletben trietilaminnal (7,96 ml, 5,80 g, 57,5 mmól) elegyítjük. Az így előllítbtt oldatot ezután klórmetil-metilészterre] (5,0 ml, 5,03 g, 62,5 mmól) elegyítjük 15 perc alatt, erős keverés közben, 0—5 C hőmérsékleten. Az így előállított keveréket további 2 órán keresztül keverjük 0-5 C -on. Ekkor a vékonyréteg kromatográfia szilikagél F 254-ben, 250 £i, 4 aceton( 12 benzol) 1 ecetsav futtatóban nem mutat sav kiindulási anyagot (Rf = 0,5) csak észtert (Rf = 0,75) 1%-os káliumpermanganátos előhívóval, történő előhívás esetén. A keveréket 0—5 C -on vízzel (100 ml) mossuk, majd 0-5 C -on pH = 7-es foszfát puff érrel (100 ml), vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és 20-25 C -on vákuumban bepárolva olajos anyagot állítunk elő. Az olajat izopropanolban (300 ml) oldjuk 25 C°-oná és oltókristállyal beoltjuk. A keveréket 0—5 C -ra hűtjük. A hűtési idő alatt az észter kristályosodik. A szuszpenziót 0-5 C -on tartjuk 4 órán keresztül, szűrjük, és a színtelen nuccstortát 100 ml 1 :1 izopropanol/heptánnal mossuk. A színtelen terméket állandó súlyig szárítjuk 40 C -on, így 21,4 g (95%-os kitermelés) cím szerinti terméket, metoximetil-3-- me t i 1 - 7 -0 - f e n o x i acetamidocef- 3-ém-4-karboxilátot állítunk elő színtelen tűs kristályok formájában: Olvadáspont: 106-107 C°: (a&s = +107C° (c= 1, metanolban), *max3 ° 4 nm/10g e (215 sh ) 3,41, 255 (3,12), 260sh (3,15), 267 (3,16), 274 (3,12), vékonyréteg, szilikagél F 254 :250 (u, a cím szerinti vegyület Rf = 0,75 (1%-os KMn04 ), IR 1800 (jJ-laktám 5 C=0), 1719 (amid C=0), 3315(NH) cm-1 KBr-ban, NMR (CDC13) 5 2,20 s, 3, CH 3 ); 5 3,42 (2d, 2, J = 18Hz, S-CH2 ), ő 3,45 (s, 3, OCH 3 ), 5 4,60 (s, 2, PhOCH2 ), 6 5,05 (d, 1, C 6 /Makfám, J = 5Hz), 6 5,40 (s, 2, CH3 OCH 2 ), 5 5,89 (d, 1, 10 C7 0-laktám). J = 15Hz, 5,89 (d, 1, C-0-laktám, aminhoz kapcsolódó, J = 15Hz), 6 7,2 (m, 6, C6 H 5 ,NH). Analízis: C18 H 20 N 2 O 6 S 15 Számított: C =55,08%, H=5,13%, N = 7,14%, S =8,17%, Talált: C = 54,68%, H = 5,24%, N = 7,07%, S =8,29%. 20 D) 3-Metil-7-|3-(D-2-amino-2-fenilacetamido)-cef-3-ém-4-karboxilát-(cefalexin) 10g (25,4 mmól) Metoximetil-3-metil-7-|3-fenoxiaceiamidocef-3-ém-4- karboxilátot 100 ml száraz 25 metilénkloridban oldunk és az így előállított oldatot -50C°-ra hűtjük. 6,20 g (29,77 mmól) foszforpentaklorid hozzáadása után N,N-dimetilanilint (7,45 ml 7,15 g, 59,0 mmól) adunk az oldathoz erős keverés közben. A keveréket —30 és 35 C -ra 30 melegítjük és ezen a hőmérsékleten tartjuk 2 órán keresztül. Ekkor vékonyrétegkromatográfiával, szilikagél F 254-en, 250. (u: 75 benzol) 25 etilacetát rendszerben Rf = 0,8-nál klórimid jelenlétét mutatjuk ki, kiindulási anyag (Rt - = 0,5) nincs jelen, 35 1%-os káliumpermanganát előhívóval. A klórozási reakcióelegyet -50 C -ra hűtjük, és egy részletben száraz metanolt ^30 ml, 23,7 g, 0,74 mól), amelyet előzetesen -30 C -ra hűtünk, adunk hozzá. Az így előállított világossárga éles oldatot -35 C -ra me-40 legítjük, és ezen a hőmérsékleten tartjuk 2 órán keresztül. Ekkor vékonyrétegkromatográfiával, a fenti rendszerben, a klórimid (Rf = 0,8) teljes eltűnését mutatjuk ki. -35C°-on, N,N-dimetilanilint (12,0 ml, 11,52 g, 95,07 mntól) adunk az így elő-45 állított keverékhez és -30 C -ra melegítjük. 5,8 g (28,15 mmól) D-(-)-/3-fenilglicilklorid-hidrökloridot adunk részletekben 0,5 óra alatt -30 C -on erős hűtés közben a rendszerbe. A savklorid beadagolása után 5 perccel éles oldat keletkezik. Az acilezési 50 keveréket 1 órán keresztül -30 C -on tartjuk, majd fokozatosan felmelegítjük, 0,5 óra alatt 0 C°-ra, 0—5 C -on 20 ml vizet adunk az oldathoz erős keverés közben. A pH, kezdetben pH = 2,5,' fokozatosan 1,3—1,5-re csökken 10 perces hidrolízis idő 55 után. A pH-t ezután 6 N sósavval 0,3-0,5-re állítjuk és a reakciót 0—5 C -on 3 órán keresztül folytatjuk. Ekkor vékonyrétegkromatográfiával szilikagél GF 254-en, 250 ß, 50 aceton/15 benzol/10 ecetsav/15 víz/ rendszerben, 1%-os káliumper-60 manganáttal előhívva cefalexin jelenléte mutatható ki (Rf = 0,8). A rétegeket szétválasztjuk és a vizes fázist egyenlő térfogatú 1-butanollal elegyítjük. A keverék pH-ját 4,5-re állítjuk 30%-os vizes nátriumhidroxiddal 0-5 C -on, azután azonnal beoltjuk 65 cefalexin-monohidráttal. A keverék 1 percen belül 4
