169383. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil H3N2 influenza-vírustörzs és az azt tartalmazó élő vírus-vakcinák előállítására

3 169383 4 Adott mennyiségű influenza-vírus és lószérum elegyének allantoisz-üregben végzett sorozat­tenyésztésével állították elő a lószérummal szemben teljes mértékben rezisztens A2 (England) 501/68 (H2N 2 ) influenza-vírustörzset, e módszer azonban 5 az A2 Hong-Kong (H 3 N 2 ) (1)68 vírustörzs rezisz­tessé tételére alkalmatlannak bizonyult [A. S. Beare és munkatársai: British Medical Journal 4, 198-201 (1969)]. 10 Ismert az is, hogy ha adott mennyiségű A2 Hong-Kong (H3 N 2 ) (1)68 vírustörzse és tengeri­malac-szérum elegyét allantoisz-üregben sorozat­tenyésztésnek vetik alá, a 17. tenyésztési lépés előtt nem érhető el pozitív eredmény (D. Ikic és 15 munkatársai: Proc. Symposium on Acute Respira­tory Diseases, 1969. Yugoslav Academy of Scien­ces and Arts, Zagreb). Kimutatták továbbá, hogy az inhibitor-rezisz­tencia viszonylag kisszámú tenyésztési lépésből álló 20 sorozattenyésztésben is tökéletessé tehető, ha az egyes tenyésztési lépésekben egymást követően ló­szérumot és tengerimalac-szérumot használunk fel, azaz szérum-inhibitorokkal szemben teljes mérték­ben rezisztens, stabil és immunogén A2 Hong-Kong 25 (H3 N 2 ) influenza vírustörzse állítható elő akkor, ha valamely, előzetesen tojások allantoisz-üregében növekvő koncentrációjú lószérum jelenlétében soro­zattenyésztésnek alávetett A2 Hong-Kong (H 3 N 2 ) influenza vírustörzset tojások allantoisz-üregében, 30 növekvő koncentrációjú tengerimalac-szérum jelen­létében további sorozattenyésztésnek vetnek alá. Azt tapasztaltuk, hogy szérum-inhibitorokkal szemben teljes mértékben rezisztens, és intranazális 35 adagolásra alkalmas vakcinák készítéséhez igen elő­nyösen alkalmazható, stabil H3 N 2 influenza vírus­törzs állítható elő úgy, hogy egy H3 N 2 influenza vírus és A/PR8 influenza vírus rekombinációjával előállított rekombinációs H3 N 2 influenza vírus- 40 törzset szérum jelenlétében, embriót tartalmazó to­jások allantoisz-üregében sorozattenyésztésnek ve­tünk alá. Tojásként célszerűen tyúktojásokat, míg szérumként előnyösen tengerimalac-szérumot hasz­nálhatunk fel. 45 A H3 N 2 influenza vírusok és A/PR 8 influenza vírustörzs rekombinációjával előállított rekombi­nációs H3 N 2 influenza vírustörzsek ismert mikroor­ganizmusok. 50 E rekombinációs vírusokból ismert módon [Bull. WHO 41, 643 (1969)] különíthetők el a nagy szaporodóképességgel rendelkező egyedek. Az ilyen rekombinációs vírusokból elkülönített egyedek egyes esetekben embereken legyengítetteknek mu- 55 tatkoztak, a vírusok legyengített jellegét azonban karakterisztikus reakció sem in vitro, sem in vivo körülmények között nem jelzi, ezért a különböző vírusok legyengített jellegét minden esetben embe­ren külön meg kell vizsgálni [Lancet IL, 60 1271-1273 (1971)]. A találmány szerinti eljárás során a jól szaporodó rekombináns H3N 2 influenza vírustörzset szérum-inhibitorokkal szemben rezisz­tenssé tesszük. Az így kapott módosított influenza vírus, amelynek antigén-összetétele megegyezik a 65 H3 N 2 víruséval, megtartja nagy növekedési képes­ségét. Ezzel a módszerrel olyan, élő vírus-vakcinák előállítására alkalmas vírustörzset fejlesztünk ki, amelynél nincs szükség arra, hogy az- elfogadható mértékben legyengített vírus-telepeket embereken végzett szűrővizsgálat alapján válasszuk ki, és amely stabil in vitro jellemzőkkel rendelkezik. Ezt a vírustörzset úgy állítjuk elő, hogy rekombinációs H3N 2 influenza vírust a fent ismertetett módon, szérum-inhibitorok jelenlétében embriót tartalmazó tojás allantoisz-üregében sorozattenyésztésnek ve­tünk alá. A kívánt sajátságokkal rendelkező vírus­törzs már egy vagy két tenyésztési lépés után kialakul. A találmány szerinti eljárással előállított, szé­rum-inhibitorokkal szemben teljes mértékben rezisz­tens, A-típusú H3 N 2 influenza-vírustörzset saját törzsgyűjteményünkben „Alice törzs" néven tartjuk nyilván. Az Alice törzs mintáját az American Type Culture Collection törzsgyűjteményben ATCC VR 776 számon helyeztük letétbe. ' A találmány tárgya tehát eljárás egy szérum-in­hibitorokkal szemben teljes mértékben rezisztens, stabil A-típusú H3 N 2 influenza-vírustörzs, azaz az ATCC VR 776 letéti számú Alice vírustörzs elő­állítására, A (England) 42/72 törzs és Mount Sinai A(PR8)34 törzs rekombinációjával kialakított, ATCC VR 777 letéti számú MRC-2 vírustörzsből. A találmány szerint úgy járunk el, hogy az MRC-2 vírustörzset (ATCC VR 777) embriót tar­talmazó tojás (célszerűen tyúktojás) allantoisz-üre­gében szérum (célszerűen tengerimalac-szérum) je­lenlétében legalább egyszer tenyésztjük, a tenyész­tést norma nátriumklorid-oldattal készített külön­böző, 10_1 -tői 10~ 7 -ig terjedő koncentrációjú ví­rus-elegyekkel és normál nátriumklorid-oldattal ké­szített különböző, 1/4-től 1/1000-ig terjedő szérum­-hígításokkal végezzük, és az így kapott, szérum­-inhibitorokkal szemben rezisztens törzseket (célsze­rűen a legnagyobb szérumkoncentráció és legkisebb víruskoncentráció alkalmazásával előállított törzse­ket) elkülönítjük. Nyilvánvaló, hogy akár a rekombinációs törzset, akár az elkülönített rezisztens törzset vagy mind­kettőt telepekre választhatjuk szét, vagy hígítás után számos lépésben tovább tenyészthetjük, anél­kül, hogy a találmány lényegétől eltérnénk. Az Alice vírustörzset (ATCC VR 776) a követ­kezőképpen alakítjuk ki: MRC-2 (ATÇC VR 777) vírustörzset 5 véghígításos lépésben tenyésztünk, majd a kapott törzset 10~3 koncentrációban, nor­mál sóoldattal készített 1/16 hígítású tengerimalac­-szérum jelenlétében egyszer, és 10~7 koncentrá­cióban, normál sóoldattal készített 1/4 hígítású tengerimalac-szérum jelenlétében szintén egyszer te­nyésztjük, ezután a törzset három véghígításos te­nyésztési lépésben szérum távollétében tovább te­nyésztjük, végül inokulum-termelés céljából egy to­vábbi lépésben szérum jelenlétében tenyésztjük. Az utolsó lépés az MRC-2 törzs 12. tenyésztési lépé-2

Next

/
Oldalképek
Tartalom